穿山龙总皂苷对大鼠t淋巴细胞功能影响的血清药理学研究

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1、穿山龙总皂苷对大鼠T淋巴细胞功能影响的血清药理学研究作者：于海荣，王济兴，张风英，陈建双，宋鸿儒【关键词】穿山龙总皂苷；,,T淋巴细胞增殖;,,白细胞介素　　摘要：目的用血清药理学方法研究穿山龙总皂苷对大鼠脾淋巴细胞增殖及其分泌IL2的影响，探讨其可能的作用机理。方法用MTT法测定不同浓度穿山龙含药血清（分别在培养系中加入20%，10%，5%含药血清）对ConA诱导脾淋巴细胞增殖的影响；用双抗体夹心ELISA法测定不同浓度穿山龙总苷含药血清对ConA诱导脾淋巴细胞分泌IL2影响。结果20%和10%穿山龙

2、总皂苷含药血清可抑制ConA诱导的脾淋巴细胞增殖（P<0.01,P<0.05），20%和10%穿山龙总皂苷含药血清可抑制ConA诱导的脾淋巴细胞分泌IL2（P<0.01,P<0.05）。结论穿山龙总皂苷含药血清可抑制ConA诱导的大鼠脾淋巴细胞增殖及IL2的产生。　　关键词：穿山龙总皂苷；T淋巴细胞增殖;白细胞介素2；血清药理学　　ThePharmacologicalStudyofethodsByMTTmeans,theofdifferentconcentrationsofula

3、tingspleenlymphcell`sproliferationeasured.Bydouble-antibodies-ELLISAmeans,theofdifferentconcentrationofRDNactonConA'sstimulatingspleenlymphcell'sexcretingIL2easuredasof20%and10%ulatingspleenlymphcell'sproliferation(P＜0.01,P＜0.05).Theserumof20%andthatof10

4、%ofulatingspleenlymphcell'sexcretingIL2(P＜0.01,P＜0.05).ConclusionTheserumofulatingtheproliferationandexcretionofIL2ofrats'spleenlymphcell.　　KeyaDioscoeaeNipponicae；Tlymphcellproliferation；Interleukin2；Serumpharmacology　　穿山龙又名穿地龙，野山药，为薯蓣科多年生藤本植物穿山龙薯蓣根茎。民间

5、多用其浸酒或煎服，治疗风湿性关节炎、类风湿关节炎、过敏性皮炎等均有显著疗效。由于上述几种疾病发病机制与免疫功能紊乱有关，考虑其可能具有以免疫抑制为主的免疫调节作用。穿山龙总皂苷为其提取物，本实验研究也证实有良好的抗炎及免疫抑制作用，为进一步探讨其免疫抑制作用机理，本研究采用血清药理学方法，给大鼠灌服穿山龙总皂苷,采集其含药血清，加入到体外培养系中，观察穿山龙总皂苷含药血清对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖及其分泌IL2的影响。　　1材料　　1.1药品与试剂穿山龙总皂苷，由承德市宽城皂素厂提供，实验时用含0.

6、01%吐温-80的生理盐水研成混悬液使用；泼尼松，新乡市太利药业有限公司，批号010806为纯品原料药，实验时用含0.01%吐温-80的生理盐水研成混悬液使用。青霉素、链霉素、刀豆蛋白A均为Sigma公司产品。L-谷氨酰胺、RPMI1640为GIBCO公司产品。大鼠IL2试剂盒：美国BIOSOURCE公司产品。四甲基偶氮唑蓝（MTT）瑞士FIUKA公司产品。二甲基亚砜（DMSO），Na2HPO412H2O，KH2PO4，NaCl，KCl，MgSO4H2O,MgCl2，CaCl2等均为国产分析纯。　　1.

7、2动物健康成年TT法）穿山龙总皂苷含药血清设3个剂量组，分别为20%，10%，5%含药血清组，即在培养板每孔中加入穿山龙总皂苷含药血清分别为20%，10%，5%，每个浓度组分别设相应浓度的溶媒血清组和泼尼松含药血清对照。每组设6个复孔，每孔中加入3×106个/ml细胞悬液150μl，100μg/ml的ConA10μl（终浓度为5μg/ml）,20%，10%，5%血清组各加入相应大鼠含药或溶媒血清40，20，10μl；每孔终体积不足200μl的用RPMI1640补足。将培养板置5%的CO2培养箱饱和湿度3

8、7℃培养72h。于培养结束前4h，加入5mg/ml的MTT溶液10μl，置37℃5%CO2培养箱中继续培养4h。取出培养板，每孔加入200μl二甲基亚砜（DMSO），静置20min，使紫色结晶呈完全溶解。取上清液150μl于96孔培养板中，以无细胞悬液孔调零，570nm处用酶标仪测OD值。　　2.4穿山龙总皂苷含药血清对ConA诱导脾淋巴细胞分泌IL2的影响用24孔培养板，每孔加入3×106个/ml脾细胞悬液750μl，100μg/ml的C