穿山龙总皂苷对大鼠t淋巴细胞功能影响的血清药理学研究论文

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1、穿山龙总皂苷对大鼠T淋巴细胞功能影响的血清药理学研究论文于海荣，王济兴，张风英，陈建双，宋鸿儒【关键词】穿山龙总皂苷；,,T淋巴细胞增殖;,,白细胞介素摘要：目的用血清药理学方法研究穿山龙总皂苷对大鼠脾淋巴细胞增殖及其分泌IL2的影响，探讨其可能的作用机理。方法用MTT法测定不同浓度穿山龙含药血清（分别在培养系中加入20%，10%，5%含药血清）对ConA诱导脾淋巴细胞增殖的影响；用双抗体夹心ELISA法测定不同浓度穿山龙总苷含药血清对ConA诱导脾淋巴细胞分泌IL2影响。结果20%和10%穿山龙总皂苷含药血清可抑制ConA诱导的脾淋巴

2、细胞增殖（P0.01,P0.05）.freelacologicalStudyofethodsByMTTmeans,theofdifferentconcentrationsofulatingspleenlymphcell`sproliferationeasured.Bydouble-antibodies-ELLISAmeans,theofdifferentconcentrationofRDNactonConA'sstimulatingspleenlymphcell'sexcretingIL2easuredasof20%and10%ulat

3、ingspleenlymphcell'sproliferation(P＜0.01,P＜0.05).Theserumof20%andthatof10%ofulatingspleenlymphcell'sexcretingIL2(P＜0.01,P＜0.05).ConclusionTheserumofulatingtheproliferationandexcretionofIL2ofrats'spleenlymphcell.KeyaDioscoeaeNipponicae；Tlymphcellproliferation；Interleukin2

4、；Serumpharmacology穿山龙又名穿地龙，野山药，为薯蓣科多年生藤本植物穿山龙薯蓣根茎。民间多用其浸酒或煎服，治疗风湿性关节炎、类风湿关节炎、过敏性皮炎等均有显著疗效。由于上述几种疾病发病机制与免疫功能紊乱有关，考虑其可能具有以免疫抑制为主的免疫调节作用。穿山龙总皂苷为其提取物，本实验研究也证实有良好的抗炎及免疫抑制作用，为进一步探讨其免疫抑制作用机理，本研究采用血清药理学方法，给大鼠灌服穿山龙总皂苷,采集其含药血清，加入到体外培养系中，观察穿山龙总皂苷含药血清对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖及其分泌IL2的影响。1材料1.1

5、药品与试剂穿山龙总皂苷，由承德市宽城皂素厂提供，实验时用含0.01%吐温-80的生理盐水研成混悬液使用；泼尼松，新乡市太利药业有限公司，批号010806为纯品原料药，实验时用含0.01%吐温-80的生理盐水研成混悬液使用。青霉素、链霉素、刀豆蛋白A均为Sigma公司产品。L-谷氨酰胺、RPMI1640为GIBCO公司产品。大鼠IL2试剂盒：美国BIOSOURCE公司产品。四甲基偶氮唑蓝（MTT）瑞士FIUKA公司产品。二甲基亚砜（DMSO），Na2HPO412H2O，KH2PO4，NaCl，KCl，MgSO4H2O,MgCl2，CaCl

6、2等均为国产分析纯。1.2动物健康成年I1640补足。将培养板置5%的CO2培养箱饱和湿度37℃培养72h。于培养结束前4h，加入5mg/ml的MTT溶液10μl，置37℃5%CO2培养箱中继续培养4h。取出培养板，每孔加入200μl二甲基亚砜（DMSO），静置20min，使紫色结晶呈完全溶解。取上清液150μl于96孔培养板中，以无细胞悬液孔调零，570nm处用酶标仪测OD值。2.4穿山龙总皂苷含药血清对ConA诱导脾淋巴细胞分泌IL2的影响用24孔培养板，每孔加入3×106个/ml脾细胞悬液750μl，100μg/ml的ConA溶液

7、50μl（终浓度为5μg/ml），20%，10%，5%血清组各加入相应含药血清或溶媒血清200，100，50μl，不足1ml的用RPMI1640补足，将培养板置37℃，5%CO2培养箱中，培养48h后，离心，沉淀，取上清液，测定各孔IL2含量。2.5统计学处理同一浓度的3种不同血清作用的比较、同种血清的3个不同浓度作用的比较均用F检验，若P0.05，进一步做两两q检验。3结果3.1穿山龙总皂苷含药血清对ConA诱导正常大鼠脾细胞增殖的影响①20%，10%穿山龙总皂苷含药血清组可抑制ConA诱导的正常大鼠脾细胞增殖，5%穿山龙总皂苷含药血

8、清组对ConA诱导的正常大鼠脾细胞增殖无显著抑制作用。②各剂量穿山龙总皂苷含药血清组与相应浓度的泼尼松含药血清相比较作用无显著差异（P0.05）。③不同浓度的穿山龙总皂苷含药血清对ConA诱导的正常大鼠脾细