对药“知母黄柏”的正交提取工艺研究

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1、对药“知母黄柏”的正交提取工艺研宄赵维扬1邓洁雄2吴晓薇1周海玲1(1广东省中医院药学部广东广州510120)(2广州市药品检验所四分所广东广州510405)【摘要】目的：研究对药知母、黄柏的最佳提取工艺。方法：以知母、黄柏为原料，盐酸小檗碱的含量及岀膏率加权为评价指标,采用单因素实验与L9(34)正交实验相结合的方法化选出对药知母、黄柏的最佳提取工艺。结果：80%的乙醇水溶液是对药知母、黄柏的最佳提取溶媒，最佳的提取工艺是10倍量80%的乙醇水溶液热回流提取3次每次3小时。结论：10倍量80%的乙醇水溶液热回流提取3次每次3小时所得样品中盐酸小檗碱含量出膏率最佳。

2、【关键词】黄柏；知母；盐酸小檗碱；提取工艺；正交试验【中图分类号】R243【文献标识码】B【文章编号】2095-1752(2015)24-0291-03“药有个性之特讼,方有合群之妙用”，中药通过配伍组成方剂,或可以提高与改变疗效，或可以减低毒性与副作用，以适应复杂多变的病情，是临床治疗疾病的主要形式。中药的配伍应用是祖国医学的优势所在,配伍理论也体现了中医药理论的重要特色。配伍理论涉及较广，“君臣佐使”、“七情合和”，随着时代的进步,对配伍理论的研究和方剂配伍规律的深入探讨，日渐引起学术界的高度重视。中药配伍应用是中医药学的优势之一，配伍理论也是中医基础理论之一、

3、是中医药应用的重要特色。中药配伍后可以使有效成分在数或量上得到增加，从而取得更佳的临床疗效［1,2］。药对，乂称对药，特指临床用药中常用的、相对固定的两味药物的配伍形式，是中药配伍方法的精髓［3］。知母和黄柏是临床常用的清虚热药对之一。木文就该药对的提取工艺进行优化研究。1.仪器与材料1.1仪器LC-20AT型高效液相色谱仪，日本岛津公司产品；KCV300B型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；HH-2型数显恒温水浴器，河南石予华仪器有限公司；RE-52AA型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；Y4W1103型远红外恒温干燥箱，天津市华北实验仪器有限公司；KDM型调温

4、电热套，山东省邺城永兴仪器厂。1.2材料知母，黄柏购自安国药材市场；盐酸小檗碱，中国药品生物制品鉴定所（批号：110713-200911）;甲醇、乙腈均为色谱纯，天津市康科德科技有限公司，氢氧化钠、冰乙酸、95%的乙醇水溶液、磷酸为分析纯，天津市北方天医化学试剂厂。2.方法与结果2.1标准品溶液的制备取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加入流动相（乙腈：0.1%磷酸水50:50）,制备成O.lOmg/ml的对照品溶液，用0.45μm右机微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。2.2供试品的制备取本品黄柏粉末（过三号筛）约O.lg,精密称定，置100ml量瓶中，用80ml流

5、动相（乙腈:0.1%磷酸水=50:50）超声处理（功率250W,频率40kHz）40min,放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。2.3色谱条件与检测方法色谱柱：SinoChromODS-BP（4.6*250mm,5μm）；柱温：室温；流速:1.000ml/min；进样量：10μl,检测波长:260nm/流动相:采用梯度洗脱，见表1。表1流动相梯度吋间（min）乙腈0.1%磷酸水（NaOHpH3.0）10901030701535652.4方法学考察2.4.1专属性试验分别将盐酸小檗碱对照品溶液、样品溶液和黄柏阴

6、性溶液按2.3色谱条件进样，记录色谱图，结果见图1-3，由色谱图可知黄柏阴性无干扰，该分析方法适合盐酸小檗碱的含量测定。2.4.2精密度试验取冋一对照品溶液，按照2.3色谱条件进样，于24h内连续测定6次，测定盐酸小檗碱峰面积，计算RSD=0.23%，结果表明盐酸小檗碱精密度良好。2.4.3标准曲线的制备取盐酸小檗碱对照品溶液，分别以1、2、4、6、8、10μl为进样量，用2.3色谱条件测定的峰面积峰值，进行回归处理计算的标准曲线方程是y=5472736.04x-75029.52（「=0.9999）。结果表明峰面积与盐酸小檗碱质量呈线性关系。2.4.4重复性试

7、验取知母、黄柏药材，平行6份，按2.3色谱条件进样，测定盐酸小檗碱峰面积，计算RSD=1.77%,结果表明此法重复性良好。2.4.5稳定性试验取冋一对照品溶液，按照2.3色谱条件进样，分别在0,2,4，6，8,10,24和48h进行检测，测定盐酸小檗碱含量，计算RSD=3.87%，结果表明盐酸小檗碱在48h内穂定。2.4.6冋收率试验在6份已知质量浓度的样品溶液中加入等质量的盐酸小檗碱对照品溶液，按2.3色谱条件进样，测定盐酸小檗碱峰面积，计算质量浓度和回收率，结果盐酸小檗碱的加样冋收率为103.82%,RSD为1.41%。2.5出膏率的测定按处方精密称定黄柏5