青蒿琥酯诱导凋亡的u937细胞负载树突状细胞后的免疫应答

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1、青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞负载树突状细胞后的免疫应答：郑智茵，王建峰，胡致平，沈建平，高瑞兰，叶宝东，林圣云，沈一平【摘要】本研究探讨凋亡白血病细胞负载的树突状细胞（dendriticcells,DC）能否诱导特异性细胞毒T淋巴细胞反应。用青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡,从正常人外周血单个核细胞诱生DC，将凋亡U937细胞负载DC,并添加TNFα诱导DC成熟,然后与自体T淋巴细胞共育,并联合IL2以诱生细胞毒性T淋巴细胞（CTL）；应用流式细胞术分析DC和T细胞免疫表型,采用DextranFITC内吞试验检测DC的抗原摄取能力；用ELISA法检测IL

2、12p70的产生；采用MTT法检测凋亡U937细胞负载及未负载DC诱导的自体T淋巴细胞对不同的靶细胞（U937细胞和NB4细胞）的杀伤效应。结果表明：青蒿琥酯1μg/ml作用于U937细胞48小时后,U937细胞的凋亡率达51.52%,DC在未成熟阶段时吞噬DextranFITC的能力最强，负载凋亡U937细胞之后并不能促使未成熟DC（iDC）分化为成熟DC（mDC）。凋亡U937细胞负载后的iDC在TNFα的作用下能够成为mDC。与未负载的mDC相比,凋亡U937细胞负载后的mDC（mDCApoU937）分泌IL12p70水平明显增高,而且由其所激发

3、和扩增的T细胞以CD8+的T细胞为主。细胞毒性实验显示:mDCApoU937诱导的T细胞的对U937细胞的杀伤显著超过对NB4细胞的杀伤。结论：mDCApoU937能有效地诱导特异性抗白血病效应。【关键词】白血病ImmuneResponseofDendriticCellsCapturingAntigensfromApoptoticU937CellsInducedbyArtesunateAbstractTheobjectiveofstudyicimmuneactivity.TheapoptosisofU937cellsperipheralbloodmonon

4、uclearcellsofhealthdonorsaturationinthepresenceofTNFα.MaturedDCsphocytes,andbinediaspecificCTL.ThephenotypesofDCsandTlymphocytesetry.TheabilityofDCcapturingantigenseasuredbyDextranFITCendocytosis.TheIL12p70leveleasuredbyMTTassay.TheresultssholARTfor48hoursinvitro.DCshadthemostpo

5、maturephase.ApoptoticU937cellscouldnotinducethefeaturesofDCmaturation,andapoptoticU937cellpulsedimmatureDCscouldbematuredatureDCs（mDCApoU937）DC.TheproliferationofautologousTlymphocytescoculturedDCApoU937arkableandthecontentofCD8+CTLDCApoU937hadstrongerkillingeffectonU937cellsth

6、anNB4（p<0.01）.ItisconcludedthatthemDCApoU937caneffectivelygenerateTcellmediated　　青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞负载树突细胞后的免疫应答目前,以树突状细胞（DC）为基础的免疫瘤苗已在淋巴瘤、黑色素瘤、肾癌等恶性肿瘤的临床治疗中获得明显疗效,但针对急性白血病的治疗尚处于探索阶段。我们以健康正常人外周血单个核细胞的DC负载用中药青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞作为研究模型,观察凋亡的U937细胞负载DC刺激自体T细胞转化为细胞毒T淋巴细胞（CTL）的能力,探讨用凋亡的白血病细胞

7、负载DC作为DC疫苗的可能性。材料和方法主要试剂正常人外周血白细胞层由浙江省中心血站提供；人单核细胞白血病细胞株U937由本院血液病研究所提供；人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4由浙江大学肿瘤研究所提供；青蒿琥酯（artesunate,ART）为中国桂林第二制药厂产品；rhGMCSF购自厦门特宝生物股份有限公司；rhIL4和rhTNFα购自美国PeproTech公司；rhIL2购自沈阳三生制药股份有限公司；DextranFITC（4kD）购自美国Sigma公司；IL12p70ELISAKit购自法国Diaclone公司；PE/FITC标记的鼠抗人C

8、D3、CD4、CD8单克隆抗体购自美国