青蒿琥酯诱导凋亡的u937细胞负载树突状细胞后的免疫应答论文

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1、青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞负载树突状细胞后的免疫应答论文郑智茵，王建峰，胡致平，沈建平，高瑞兰，叶宝东，林圣云，沈一平【摘要】本研究探讨凋亡白血病细胞负载的树突状细胞（dendriticcells,DC）能否诱导特异性细胞毒T淋巴细胞反应。用青蒿琥酯诱导U937细胞凋亡,从正常人外周血单个核细胞诱生DC.freell作用于U937细胞48小时后,U937细胞的凋亡率达51.52%,DC在未成熟阶段时吞噬DextranFITC的能力最强，负载凋亡U937细胞之后并不能促使未成熟DC（iDC）分

2、化为成熟DC（mDC）。凋亡U937细胞负载后的iDC在TNFα的作用下能够成为mDC。与未负载的mDC相比,凋亡U937细胞负载后的mDC（mDCApoU937）分泌IL12p70水平明显增高,而且由其所激发和扩增的T细胞以CD8+的T细胞为主。细胞毒性实验显示:mDCApoU937诱导的T细胞的对U937细胞的杀伤显著超过对NB4细胞的杀伤。结论：mDCApoU937能有效地诱导特异性抗白血病效应。【关键词】白血病ImmuneResponseofDendriticCellsCaptu

3、ringAntigensfromApoptoticU937CellsInducedbyArtesunateAbstractTheobjectiveofstudyicimmuneactivity.TheapoptosisofU937cellsperipheralbloodmononuclearcellsofhealthdonorsaturationinthepresenceofTNFα.MaturedDCsphocytes,andbinediaspecificCTL.Thephenotypeso

4、fDCsandTlymphocytesetry.TheabilityofDCcapturingantigenseasuredbyDextranFITCendocytosis.TheIL12p70leveleasuredbyMTTassay.TheresultssholARTfor48hoursinvitro.DCshadthemostpomaturephase.ApoptoticU937cellscouldnotinducethefeaturesofDCmaturation,.freelmat

5、ureDCscouldbematuredatureDCs（mDCApoU937）DC.TheproliferationofautologousTlymphocytescoculturedDCApoU937arkableandthecontentofCD8+CTLDCApoU937hadstrongerkillingeffectonU937cellsthanNB4（p0.01）.ItisconcludedthatthemDCApoU937caneffectivelygenerateTcel

6、lmediated青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞负载树突细胞后的免疫应答目前,以树突状细胞（DC）为基础的免疫瘤苗已在淋巴瘤、黑色素瘤、肾癌等恶性肿瘤的临床治疗中获得明显疗效,但针对急性白血病的治疗尚处于探索阶段。我们以健康正常人外周血单个核细胞来源的DC负载用中药青蒿琥酯诱导凋亡的U937细胞作为研究模型,观察凋亡的U937细胞负载DC刺激自体T细胞转化为细胞毒T淋巴细胞（CTL）的能力,探讨用凋亡的白血病细胞负载DC作为DC疫苗的可能性。材料和方法主要试剂正常人外周血白细胞层由浙江省中心血站

7、提供；人单核细胞白血病细胞株U937由本院血液病研究所提供；人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4由浙江大学肿瘤研究所提供；青蒿琥酯（artesunate,ART）为中国桂林第二制药厂产品；rhGMCSF购自厦门特宝生物股份有限公司；rhIL4和rhTNFα购自美国PeproTech公司；rhIL2购自沈阳三生制药股份有限公司；DextranFITC（4kD）购自美国Sigma公司；IL12p70ELISAKit购自法国Diaclone公司；PE/FITC标记的鼠抗人CD3、CD4、CD8

8、单克隆抗体购自美国BectonDickinson公司；CD80、CD83、CD86、HLADR等购自美国PeproTech公司；RPMI1640培养液购自美国Gibco公司；胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司；GenomicDNAMiniprepKitV.2购自上海申能博彩生物科技有限公司。U937细胞凋亡的诱导及检测按已报告的方法［1］,取对数生长期的U937细胞,调整浓度为1×105/ml，加入ART的终浓度为0.25、0.5、1、2μg/ml,置37℃、5%CO2培