维吾尔民族非小细胞肺癌组织中的ercc1、brca1的表达及预后关系的研究

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1、材料与方法自确诊之日起，以重复住院、门诊病历及电话方式进行随访至2010年1月，除失访病例外，所有病例均有完整的临床随访资料。随访时间1～1762天，中位随访402天，平均530.75天，其中42例患者已死亡，存活27例，失访11例，失访率13.75%。在随访过程中，患者死于其他疾病或意外、未能随访到患者或其亲属、在随访截止日期尚生存的患者为截尾数据，统计学上按删失计算。2.3纳入标准2.3.1民族为维吾尔族的患者；2.3.2经组织病理证实为非小细胞肺癌；2.3.3诊断前未行放射治疗；2.3.4诊断前、术中未行化学治疗；2.3.5诊断前未行分子靶向药物治疗；2.3.6诊断前未合并心衰、肝功能衰

2、竭、肾衰等疾病者；2.3.7参照ZPS评分系统，PS评分≤2分，见下表1。表1病人的一般情况计分标准Karnofsky(KPS)评分评分Zubrod-ECOGWHO(ZPS)正常、无症状及体征1000正常活动能进行正常活动有轻微症状及体征901有症状但几乎可自由活动勉强可以进行正常活动，有一些症状及体征生活可自理但不能维持正常生活或工作80702有时卧床，但白天卧床时间不超过50%有时需人扶助，但大多数时间自理60常需人照料503需要卧床卧床时间白天超过50%生活不能自理，需特别照顾40生活严重不能自理304卧床不起病重，需住院积极支持治疗20病危，临近死亡死亡1005死亡2.4排除标准2.4

3、.1民族为非维吾尔族患者；2.4.2术后病理证实为小细胞肺癌者；2.4.3诊断前行放射治疗；2.4.4诊断前、术中行化学治疗；2.4.5诊断前行分子靶向药物治疗；2.4.6妊娠、哺乳期或未育患者；—5—新疆医科大学医学硕士学位论文2.3诊断前合并心衰、肝功能衰竭、肾衰等疾病者；2.4参照ZPS评分系统，PS评分＞2分；2.5伴随有其他恶性肿瘤病史者。3．主要试剂与仪器2.3.1主要试剂ERCC1抗体为鼠抗人单克隆抗体购自SantaCruz生物工程公司.试剂盒内容试剂：3%H2O2去离子水试剂1：PloymerHelper试剂2：Polyperoxidase-anti-mouseIgGBRCA1

4、抗体为鼠抗人单克隆抗体购自SantaCruz生物工程公司.试剂盒内容试剂：3%H2O2去离子水试剂1：PloymerHelper(即用型)试剂2：Polyperoxidase-anti-mouseIgG(即用型)2.3.2本研究使用的抗体的名称、特异性及来源抗体浓度来源ERCC1抗体1：100SantaCruz生物工程公司BRCA1抗体1：100SantaCruz生物工程公司抗原固定剂10%中性福尔马林新疆医科大学三附院病理科提供Immuno-Bridge试剂盒北京中杉金桥生物技术有限公司DAB显色液新疆医科大学三附院病理科提供PBS缓冲液新疆医科大学三附院病理科提供2.3.3主要仪器BMJ-

5、包埋机常州中威公司LEIKARM2235切片机日本莱卡公司LEIKAH11210漂片处理仪日本莱卡公司电热干燥箱上海电器Sharp微波炉日本卧式染色缸加工品Haier冰箱青岛海尔公司Robertshow电热恒温培养厢日本TGL-16C高速台式离心机上海安亭科学仪器厂Olympus荧光显微镜日本欧林巴斯公司—6—材料与方法Sony图文分析系统日本索尼公司4．实验方法2.3收集标本收集80例维吾尔族非小细胞肺癌手术、纤支镜或肺穿刺活检标本。取材标本经中性福尔马林固定、脱水、常规石蜡包埋、制备4um连续切片，并经免疫组化染色，由病理科医生进行诊断和病理分级。2.4免疫染色2.3.1实验方法采用免疫组

6、化ElivisionTMplus[12]标准方法检测ERCC1、BRCA1蛋白在石蜡包埋的病理标本中的表达水平。2.3.2ERCC1、BRCA1的检测方法组织石蜡切片常规脱蜡水化后，进行预处理，以3％的H2O2去离子水孵育10分钟，阻断内源性过氧化物酶，蒸馏水洗3次，每次2min；分别滴加鼠抗人ERCC1（1：100倍稀释）与BRCA1单抗，室温孵育1-2小时，蒸馏水洗3次，每次2min；，滴加一抗，37℃孵育20min，蒸馏水洗3次，每次2min；滴加二抗工作液，37℃孵育20-30分钟，蒸馏水洗3次，每次2min；应用DAB-H2O2显色5min；自来水充分冲洗，苏木素复染，脱水，二甲苯透

7、明，中性树脂封片、编号。5．判断标准ERCC1蛋白阳性染色者在细胞核染色呈棕黄色或棕红色颗粒沉着，BRCA1蛋白阳性染色者在细胞核有棕黄色颗粒沉着。在400×视野下，计算1000个肿瘤细胞中阳性细胞数，参照Wachters等[13]方法来分析免疫组织化学ERCC1及BRCA1的表达水平，即阴性表达(-)：不表达或阳性细胞数≤10%；阳性表达(+)：视野中阳性细胞>10%。由病理科两位医师(其中一位