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1、正交实验法优选沙枣花总黄酮提取工艺及沙枣花醇提物体外抗氧化活性的研沙枣花为胡颓子科植物沙枣Elaeagnusan-gustifoliaL.的花,主产于西北地区，在宁夏地区资源非常丰富。据《中药大辞典》记载,沙枣花主要含山萘酚、花白素、脂肪油和少量挥发油,具有止咳平喘的功能,可用于治疗慢性气管炎[1]。目前对沙枣花研究较多的是其挥发油成分[2]，但也有人初步研究了青海省沙枣花黄酮类物质的提取方法[3]，已有人利用沙枣花提取液中的功能成分黄酮类化合物对羟基自由基进行了清除试验研究，发现沙枣花中的黄酮类化合物对羟基自由基有着较好的清除效率[4],本实验观察了AE-EAB对氧自由基的清
2、除作用，发现AE-EAB对氧自由基有清除作用，并随着浓度的升高而增强。本文以提取物中总黄酮含量为指标,采用正交实验设计和紫外分光光度法对沙枣花中总黄酮的提取条件及含量测定进行了系统的研究,为进一步开发利用沙枣花及沙枣资源提供科学依据。 1仪器与试药 1.1仪器旋转蒸发仪(上海亚荣);SHB-III型循环式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);KQ-3200DE数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);Mili-Q超纯水仪(法国);电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);7225N分光光度计(北京瑞利分析仪器公司)。 1.2药材与试剂沙枣花采自宁夏医学院旁沙造林，经宁夏区
3、药品检验所中药研究室主任韩文欣鉴定为胡颓子科植物沙枣树ElaeagnusangustifoliaL.的新鲜花序。水为超纯水,其它试剂均为分析纯。芦丁标准品(中国药品生物制品检定所，批号：100080)。 2方法 2.1分光光度法测定沙枣花总黄酮的含量[5] 2.1.1对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品50mg,置于25ml量瓶中,加甲醇适量,置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml,置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1ml中含无水芦丁0.2mg)。 2.1.2标准曲线的制备精密吸取标准溶液1，2，3，4，5，6ml
4、置25ml量瓶中,各加亚硝酸钠溶液1.00ml,混匀,放置显色6min,加10%硝酸铝溶液1ml,摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10ml,再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法在500nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。其回归方程Y=10.316X-0.0026,相关系数r=0.9992,线性关系良好。见表1，图1。表1标准曲线测定数据图1芦丁浓度-吸光度标准曲线 2.1.3供试品溶液制备取本品粗粉1g，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚适量，加热回流至提取液无色，放冷，弃去乙醚液。再加甲醇90ml，加
5、热回流至提取液无色，转移至100ml量瓶中，用甲醇少量洗涤容器，洗液并入同一量瓶，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10ml,置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。紧密量取3ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加亚硝酸钠”起依法测定吸光度。 2.1.4稳定性实验精密吸取对照品溶液和供试品溶液各3ml置25ml容量瓶,分别按照“2.1.2”项中“加亚硝酸钠溶液1.00ml”起,至“加氢氧化钠试液10ml,再加水至刻度，摇匀，放置”操作,用以同样方法加入显色剂的溶剂作空白,分别在2,5,15,30,45,60min测定吸收度,结果表明,对照品吸收度RSD=0.764(
6、n=6),样品吸收度RSD=4.556,说明稳定性较好。结果见表2。表2稳定性实验结果 2.1.5精密度实验精密吸取同一份对照品和供试品溶液各5份,每份3ml置25ml容量瓶,按照“2.1.2项中“加亚硝酸钠溶液1.00ml”起,至“加氢氧化钠试液10ml,再加水至刻度，摇匀，放置”操作,用以同样方法加入显色剂的溶剂作空白,测定吸收度,结果表明,对照品吸收度RSD=0.185%(n=5),样品吸收度RSD=4.141%(n=5),说明精密度较好。数据见表3。 2.1.6重复性实验精密称定同一批沙枣花粉末5份各1.0g,按照“供试品溶液的制备”方法制得供试品溶液,测定吸收度,
7、结果表明,RSD=4.214,说明重复性较好。结果见表4。表3精密度实验结果表4重复性实验结果 2.1.7加样回收率实验职称论文发表费用 取已知总黄酮含量的沙枣花粉末(含总黄酮13.41%)3份,每份1g,精密称定,然后照“供试品溶液的制备”项下进行制备，制备后各取3ml，同时分别加入已知浓度的芦丁标准液1.0,2.0,3.0ml，依照上述样品测定的方法测定,求出回收率结果，结果表明,3次测定的平均回收率为105.0%，(RSD=0.525%，n=3)。说明该测定方法测得的结果准确。结果
