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1、鱼藤酮对PC12细胞Caspase【关键词】帕金森病EffectofrotenoneonCaspase3,FasandFaslandrelationshipetry.1.0μmol/LrotenoneediumatdifferenttimesandtheproteinexpressionofCaspase3andFas/Faslorphologicalchangesofapoptosisittingelectronmicroscopy(TEM).RESULTS:Theratioofapoptos
2、isincontrolgroupthatincontrolgroup(P<0.02).The1.0μmol/Lrotenonehadmarkedeffect(P<0.01).oothmembrane,decreasedcellularprotruding,smallratioofnucleus/cytoplasm,increasedspaceincytoplasm,increasedgapofperipheryinnucleusuncertainly,andincreasedpoik
3、ilochromatincollectedinedge.CONCLUSION:RotenonemaydamagethePC12cellsbyactivationofCaspase3andFas/Faslapoptosispathicroscopy,electron 【摘要】目的：探讨鱼藤酮对PC12细胞Caspase3,Fas和Fasl的作用及与凋亡的关系.方法：应用流式细胞仪(floetry,FCM)检测不同浓度鱼藤酮对体外培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞株凋亡率的影响，并检测1.0
4、μmol/L鱼藤酮干预不同时段对Caspase3、Fas/Fasl蛋白表达的影响，透射电镜观察凋亡形态学的改变.结果：对照组凋亡率为0.0199±0.0020，经0.1,1.0,2.0和3.0μmol/L不同浓度鱼藤酮干预2d，凋亡率明显增加其变换值分别为：0.0305±0.0030,0.0486±0.0073,0.0313±0.0041和0.0285±0.0031，与对照组比较有显著差别(P<0.02),实验组中以1.0μmol/L作用最显著(P<0.01)，当鱼藤酮浓度大于1.0
5、μmol/L时，其作用呈剂量依赖性递减.对照组Caspase3,Fas和FaslFI值分别为1.0±0.03,1.0±0.02和1.0±0.04；经鱼藤酮干预3,6,12,24和48h，各组均有Caspase3,Fas和Fasl表达，其中以鱼藤酮干预6h时Fas/Fasl表达最明显(P<0.01)，而12h时Caspase3表达最明显(P<0.01).电镜下观察到细胞膜不光滑,细胞突起减少，核质比小，细胞质空间增大，核周隙增大、不规则，异染色质增多、边集.结论：鱼藤酮可通过激活Cas
6、pase3,Fas/Fasl凋亡途径损伤PC12细胞. 【关键词】 鱼藤酮；细胞凋亡；帕金森病；显微镜检查，电子 0引言 帕金森病(Parkinsonsdisease,PD)是严重威胁人类生存的神经系统退行性疾病，临床症状主要表现为：静止性震颤、运动迟缓、肢体僵、姿势平衡障碍以及植物神经症状，病情呈进行性加重，这严重限制了患者的活动能力，影响了患者的生活质量，不仅给患者造成了极大的痛苦，也给家庭和社会带来了沉重的负担.此外，PD的神经病理学特征主要表现为黑质致密区选择性多巴胺能神经元变性和
7、进行性脱失，部分存活的神经元内出现lea,美国)；鱼藤酮(华美公司，中国)；谷氨酰胺，tritonX100,PI,枸橼酸钠和RNA酶(Sigma,美国)；Fas抗体，Fasl抗体，Caspase3抗体，FITC荧光素抗体(Scbt公司，美国)；500g/L戊二醛(天津四通化工厂). 1.2方法 1.2.1PC12细胞培养将PC12细胞株悬浮于DMEM培养基（含100mL/L灭活马血清，50mL/L灭活胎牛血清，2mmol/L谷氨酰胺，100ku/L青霉素，100mg/L卡那霉素）中，以5×1
8、08/L接种到预先涂上多聚赖氨酸的75cm2培养瓶中，置于37℃、含50mL/LCO2、饱和湿度的培养箱中孵育，48h换液,用于以下实验. 1.2.2流式细胞仪检测鱼藤酮对PC12细胞凋亡率的影响将细胞以5×108/L分别传入25cm2培养瓶，分别设1个对照组、4个实验组，待细胞进入对数生长期，对照组换新鲜培养液，实验组加入鱼藤酮使其终浓度分别为:0.1,1.0,2.0和3.0μmol/L,孵育24h，收集细胞，PBS洗2遍，预冷的700mL/L乙醇4℃固定备用，准备流式细胞仪测定样品：①10
