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1、鱼藤酮对PC12细胞Caspase论文【关键词】帕金森病EffectofrotenoneonCaspase3,FasandFaslandrelationshipetry.1.0μmol/LrotenoneediumatdifferenttimesandtheproteinexpressionofCaspase3andFas/Faslorphologicalchangesofapoptosisittingelectronmicroscopy(TEM).RESULTS:Theratioofapoptosisincontrolgroupthatincontr
2、olgroup(P0.02).The1.0μmol/Lrotenonehadmarkedeffect(P0.01).oothmembrane,decreasedcellularprotruding,smallratioofnucleus/cytoplasm,increasedspaceincytoplasm,increasedgapofperipheryinnucleusuncertainly,andincreasedpoikilochromatincollectedinedge.CONCLUSION:RotenonemaydamagethePC12c
3、ellsbyactivationofCaspase3andFas/Faslapoptosispathicroscopy,electron【摘要】目的：探讨鱼藤酮对PC12细胞Caspase3,Fas和Fasl的作用及与凋亡的关系.方法：应用流式细胞仪(floetry,FCM)检测不同浓度鱼藤酮对体外培养大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞株凋亡率的影响，并检测1.0μmol/L鱼藤酮干预不同时段对Caspase3、Fas/Fasl蛋白表达的影响，透射电镜观察凋亡形态学的改变.结果：对照组凋亡率为0.0199±0.0020，经0.1,1.0,2.0和3.
4、0μmol/L不同浓度鱼藤酮干预2d，凋亡率明显增加其变换值分别为：0.0305±0.0030,0.0486±0.0073,0.0313±0.0041和0.0285±0.0031，与对照组比较有显著差别(P0.02),实验组中以1.0μmol/L作用最显著(P0.01)，当鱼藤酮浓度大于1.0μmol/L时，其作用呈剂量依赖性递减.对照组Caspase3,Fas和FaslFI值分别为1.0±0.03,1.0±0.02和1.0±0.04；经鱼藤酮干预3,6,12,24和48h.freela,美国)；鱼藤酮(华美公司，中国)；谷氨酰胺，tritonX100
5、,PI,枸橼酸钠和RNA酶(Sigma,美国)；Fas抗体，Fasl抗体，Caspase3抗体，FITC荧光素抗体(Scbt公司，美国)；500g/L戊二醛(天津四通化工厂).1.2方法1.2.1PC12细胞培养将PC12细胞株悬浮于DMEM培养基（含100mL/L灭活马血清，50mL/L灭活胎牛血清，2mmol/L谷氨酰胺，100ku/L青霉素，100mg/L卡那霉素）中，以5×108/L接种到预先涂上多聚赖氨酸的75cm2培养瓶中，置于37℃、含50mL/LCO2、饱和湿度的培养箱中孵育，48h换液,用于以下实验.1.2.2流式细胞仪检测鱼藤酮对P
6、C12细胞凋亡率的影响将细胞以5×108/L分别传入25cm2培养瓶，分别设1个对照组、4个实验组，待细胞进入对数生长期，对照组换新鲜培养液，实验组加入鱼藤酮使其终浓度分别为:0.1,1.0,2.0和3.0μmol/L,孵育24h，收集细胞，PBS洗2遍，预冷的700mL/L乙醇4℃固定备用，准备流式细胞仪测定样品：①1000r/min离心5min，PBS洗1遍;②PI染液(由PI10mg，枸橼酸钠200mg，RNA酶2mg，10mL/LtritonX1002mL,9g/L盐水130mL，用双蒸水稀释至200mL避光备用)，1mL进行室温下DNA标记2
7、0min;③PBS洗1遍，将各实验组细胞重悬于1mLPBS中，500目铜网分别过滤，应用FCM（伯乐公司，美国）测定荧光值，每组检测10000个细胞,每组实验重复2次.1.2.3流式细胞仪检测Caspase3,Fas和Fasl的表达将细胞以5×108/mL分别传入25cm2培养瓶，Caspase3,Fas/Fasl各设正常对照组1组，实验组5组.待细胞呈对数生长时，对照组换新鲜培养液，孵育24h，实验组加入终浓度为1.0μmol/L鱼藤酮，分别孵育3,6,12,24和48h.收集细胞，PBS洗2遍，预冷的700mL/L乙醇4℃固定备用，准备流式细胞测定
8、:①1000r/min离心5min，PBS洗1遍;②各实验组分别加入Caspase3,Fas和
