文山野生金线莲总黄酮及多糖含量测定

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1、文山野生金线莲总黄酮及多糖含量测定张志信，张铁，赵保发，胡国海，张仕秀【摘要】　　　　摘要：目的优选文山野生金线莲种质资源。方法通过测定不同种金线莲中的总黄酮及多糖含量，并以总黄酮及多糖含量为指标，筛选优质金线莲种质资源。结果6个野生金线莲样品中总黄酮含量基本相同，多糖含量相差较大，其中2号金线莲（花叶开唇兰Anocetochilusroxburghii，叶片无明显叶脉的“金线莲公”）总黄酮含量最高，为43.01(mg/gDethodsInordertogetthehighqualityidioplasmresourcesofAnocetochilusinedindifferentAn

2、ocetochilus.plants.ResultsTotalflavonoidscontentse,andthepolysaccharidecontentdifferenceples.Thehighestcontentoftotalflavonoidsg/gDple,andthehighestcontentofplolysaccharideg/gDple.ConclusionA.roxburghiiandA.chapaensisarefinegermplasmsinl进行总黄酮含量测定；把残渣转到锥形瓶中，用选择好的提取工艺进行提取，得到提取液，用蒸馏水定容至800ml进行多糖含量测

3、定。　　2.2总黄酮测定方法　　2.2.1标准曲线的制作〔4〕　　精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品10mg用20ml乙醇溶解后，转移到100ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀即得（溶液中含无水芦丁的含量为0.1mg/ml）。精密吸取芦丁标准液0.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0ml。分别置于50ml容量瓶中，各加水至12ml，加5%NaNO2溶液2ml，混匀，放置6min，加10%Al(NO3)3溶液2ml，混匀，放置6min,加4%NaOH20ml,再加水至50ml，放置15min，以不加芦丁对照品的试剂作空白对照。按分光光度法在503nm（全波长扫描，在50

4、3nm处有最大吸收）波长处测定吸光度。以所取标准液含有的芦丁标样量mg数和吸光度数据经回归处理，得到回归方程：Y=0.2196X-0.0112，相关系数r=0.9993。　　2.2.2总黄酮含量计算方法　　精密吸取1.0ml多糖提取液，按“2.2.1”项下内容操作，再根据下列公式计算，测定结果。　　样品中的总黄酮含量（以芦丁计）：　　总黄酮含量（mg/gDl样品液含黄酮量(mg)，g，置于250ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，配成0.1mg/ml的标准溶液。分别移取上述标准溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1.0ml，依次加水使最终体积为1.0m

5、l，另取1.0ml蒸馏水作为空白。每一试管中加入1.0ml5%苯酚溶液，混匀，迅速加入5.0ml浓硫酸，振摇5min后放置35min，在最大吸收波长490nm处测定吸光度，得回归方程：A=5.8824C-0.0003，r=0.9954。其中A为吸光度，C为葡萄糖浓度（mg/ml）。　　2.3.2多糖含量计算方法　　精密吸取1.0ml多糖提取液，按“2.3.1”项下内容操作，再根据下列公式计算，测定结果。　　样品中的多糖含量（以葡萄糖计）：　　多糖含量（mg/gDl样品液含多糖量(mg)，l共3份，分别加入一定量的芦丁对照品，按“2.2.2”项下操作。用紫外分光光度计测定吸光度，得出总黄

6、酮含量，根据回收率公式计算出回收率。　　回收率（%）=（混合后测得总黄酮含量-样品中总黄酮含量）芦丁对照品加入量×100%　　2.3.4总黄酮测定　　精密度实验精密吸取3号金线莲样品甲醇提取液1ml，共6份，按“2.2.2”测定。　　2.3.5葡萄糖回收率的测定　　经过“2.3.3”处理后的残渣用水作溶剂进行提取，得到的提取液取20ml共3份，分别加入一定量的葡萄糖对照品，按“2.3.2”项下方法操作。用紫外分光光度计测定吸光度，得出多糖含量，根据回收率公式计算出回收率。　　回收率（%）=（混合后测得总黄酮含量-样品中总黄酮含量）葡萄糖对照品加入量×100%　　2.3.6多糖测定　　精

7、密度实验经过“2.3.4”处理后的残渣，进行水提，得到的提取液定容至800ml，精密吸取1ml，共6份，按“2.3.2”项下方法测定。　　3结果与讨论　　3.1超声作用时间对多糖提取率的影响　　为了探讨超声作用时间对金线莲多糖提取效果的影响，取1g3号野生金线莲样品，加入40ml蒸馏水，水浴温度70℃，采用不同超声时间提取2次，按“2.3”项下测定多糖含量。结果见表2。表2超声作用时间对多糖提取率的影响（略）　　由表2可以看出，随着超声时间的增