高效液相色谱法在中药化学指纹图谱研究中的应用（6）课件

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1、高效液相色谱法在中药化学指纹图谱研究中的应用蒲晓辉河南大学药学院２010年11月3日1.1中药指纹图谱的定义中药指纹图谱中药化学(成分)指纹图谱中药生物指纹图谱中药生物指纹图谱中药材DNA指纹图谱中药基因组学指纹图谱中药蛋白组学指纹图谱生物活性指纹图谱光谱指纹图谱色谱指纹图谱联用技术指纹图谱中药化学(成分)指纹图谱1.2指纹化学图谱的起源与发展中药化学指纹图谱借用DNA指纹图谱发展而来中药指纹图谱，即中药身份证，实际上是一种保证中药质量的措施，是指对某种中药材或中成药等运用现代分离分析科学的手段，得到能够标示该中药的色谱或光谱的图谱，最终用来对

2、中药质量评价的科学性方式。光谱指纹图谱联用技术指纹图谱红外光谱质谱紫外可见光谱核磁共振法X射线衍射法GC/MSHPLC/MSHPLC/MS/MS色谱指纹图谱TCLGCHPLC高速逆流色谱法(HSCCC)高效毛细管电泳法(HPCE)高效液相色谱不受样品挥发度和热稳定性的限制，样品中大多数成分均可在高效液相色谱仪上进行分析检测，是构建指纹图谱的主要方法之一。由于中药成分的复杂性，构建指纹图谱一般采用梯度洗脱，因为逐步提高流动相洗脱能力可获得较多色谱峰，提供更多指纹信息。中药化学指纹图谱中药材(原料药材)指纹图谱中药原料药(包括饮片、配伍颗粒)指纹图

3、谱中间产物指纹图谱中药制剂指纹图谱1.3指纹化学图谱研究的直接目的（1）对中药质量控制的补充和提高。（2）控制中间体、成品的一致性，减少批间差异。1.3.1对中药质量控制的补充和提高现有《中国药典》质量控制方法及新药申报资料，往往以1个或1个以上成分为控制指标，在一定程度上反映了原药材、中间体及成品的质量，但任何单一的成分都难以准确、全面地评价中药质量，不仅不能进行真伪鉴别和优劣判别，在很多情况下，所检测的指标成分还不具有“惟一性”，另外使用器材比较简单，操作比较粗糙，有时重现性差。《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求》要求将指纹图谱检测指标限定

4、作为质量标准单列项目，这种做法是对现行中药质量控制标准的有益补充。一个理想的指纹图谱不仅能达到定性鉴别的目的，色谱图中大部分色谱峰应达到基线分离，对大部分成分应可进行定量分析。在没有对照品的情况下，也可以用已知标准品针对其他未知或无标准品的色谱峰进行定量。因此，可以说中药指纹图谱是对现行中药质量标准控制方法的提高。1.3.2控制中间体、成品的一致性，减少批间差异中药生产的原材料，因土壤、气候等环境因素及采收加工的不同，实际使用时不能保证药材质量的稳定，经加工提取得到的中间体，每个批次在成分含量、成分组成及各成分比例方面都不能保持一致。中药化学指

5、纹图谱中，有相当部分为次生代谢产物，而这些产物的组成和含量不仅和药材本身的种属有关，同时还与植物后天所处的地域环境、生长条件、采摘时间和炮制方法有很大的关系。对于中成药来说，与产品的加工过程也有很大的联系。不同的加工过程与方法都将对所得的指纹图谱有相当影响，表现在峰高、峰面积、保留时间以及峰数量上的变化等。因此，中药化学指纹图谱不仅可以用来对生药的真伪、优劣进行鉴定，同时还可以对中药的加工过程进行监测，可以有效地分析鉴定经过不同的炮制、加工的中成药。虽然无论是原药材、中间体还是成品，都因组方已固定、生产工艺相对恒定，而使药品的安全性不可能直接通

6、过指纹图谱来保障，但因为中药指纹图谱可直接解决中间体、成品的批间一致性及稳定性问题，从而可以间接并最终保障成品的安全性和有效性。样品收集供试品的制备参照物的选择与制备色谱条件的优化样品测试及方法学考察指纹图谱的建立指纹图谱的分析与评价1.4中药HPLC指纹图谱构建程序用于鉴别中药材的真伪、易混淆品种；用于评价中药材、饮片质量控制；用于中药提取物或制剂中间体的质量控制；用于中成药的质量监控；用于研究中药的稳定性。1.5中药化学指纹图谱的实际应用示例一：HPLC指纹图谱法鉴别远志及其伪品李云峰，房敏峰，张文娟，等.西北大学学报(自然科学版),200

7、8,38(2):265.1.5.1中药材的真伪、易混淆品种的鉴别1-1色谱条件：色谱柱：HypersilC18柱(4.6mm×250mm，5µm)；流动相：乙腈-0.5%磷酸(25:75)；流速：1.0mL/min；检测波长：310nm；柱温：40℃；进样量：20µL。指纹图谱记录时间1h。1-2供试液的制备精密称取远志、卵叶远志、白薇、麦冬须根药材各10g，分别置100mL锥形瓶中，加50%甲醇25mL，超声30min，过滤，滤液用50%甲醇定容至25mL，备用。2方法学考察2-1精密度试验取陕西合阳远志药材的供试品溶液，连续进样5次，每次2

8、0µL，检测色谱峰，测定各峰的相对保留时间和相对峰面积，结果各峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于2.1%，符合指纹图谱技术要求，说明测定方法精密