高效液相色谱法测定早期肾移植患者麦考酚酸的血药浓度

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1、高效液相色谱法测定早期肾移植患者麦考酚酸的血药浓度：董卫华，董亚琳，郑鑫，尤海生【摘要】　　目的建立高效液相色谱法测定人血浆中麦考酚酸浓度的简便方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为C18柱(3.9mm×300mm)，以40mmoL/L四丁基溴化铵乙腈[55∶45(V∶V)，H3PO4调pH=4]为流动相，流速0.8mL/min，紫外检测波长254nm，用甲醇沉淀蛋白法进行血样处理。结果麦考酚酸的线性范围为0.8～51.54mg/L(r=0.9998)，平均相对回收率95.5%～109.2%，提取回收率>90%，批内和批间RSD<

2、;10%。结论本方法准确、简便，可用于麦考酚酸的血药浓度监测和生物等效性研究。【关键词】肾移植；麦考酚吗乙酯；麦考酚酸；高效液相色谱法(HPLC)；血药浓度　　ABSTRACT:ObjectiveToestablishahighperformanceliquidchromatographymethodfordeterminationofmycophenolicacidinhumanplasma.MethodsThemethodedn(3.9mm×300mm).Themobilephaseconsistedof40mmoL/LTBAsolut

3、ionacetonitrileadjustedtopH4L/min.TheUVdetection.Plasmasamplesethanol.ResultsThelinearconcentrationofthecalibrationcurverangedfrom0.8to51.45mg/L(r=0.9998).Therelativerecoveriesorethan90%.Relativestandarddeviation(RSD)ofintradayandinterdayassaysethodisprovedtobereliableands

4、impleformonitoringmycophenolicacidinhumanplasmaandbioequivalenceresearch.　　KEYMF)是新型免疫抑制剂，为前体药物，口服或注射后迅速在体内水解转化为活性代谢物麦考酚酸(mycophenolicacid,MPA)，通过非竞争性抑制嘌呤合成途径中次黄嘌呤核苷酸脱氢酶的活性，抑制T、B淋巴细胞的增殖反应，发挥免疫抑制作用，临床用于预防和治疗肾、肝、心脏及骨髓移植的排异反应。MMF在血浆中几乎无法检测，而MPA浓度高可以检测到，所以MMF的药代动力学特点实际由MPA在体内的代

5、谢过程来反映[1]。以前认为，MMF治疗窗宽、药物代谢稳定、个体差异小、不需监测血药浓度，但随着其在临床上广泛应用，发现器官移植患者MPA血药浓度水平与排斥反应发生率有很强的相关性[2]，且与MMF相关的不良反应如胃肠功能失调、白细胞减少症及相关感染、恶变的发生率呈升高趋势，所以监测移植患者MPA血药浓度，制订个体化给药方案，对于指导MMF的安全有效用药具有重要意义。基于此，我们建立了一种简便、快速测定MPA浓度的高效液相色谱(highperformanceliquidchromatography,HPLC)法，可用于常规血药浓度的监测。　　

6、1材料与方法　　1.1材料　　仪器：美国×22R高速冷冻离心机，美国BeckmanCoulter公司生产；SK1快速混匀器，江苏金坛国华仪器厂。试剂和药品：麦考酚吗乙酯片(骁悉，瑞士巴塞尔豪夫迈·罗氏制药有限公司制造，上海罗氏制药有限公司分装)；麦考酚酸对照品(批号ECNo.2461193，含量99.02%，上海罗氏制药有限公司提供)；四丁基溴化铵(TBA)，分析纯，天津市博迪化工有限公司生产；乙腈、甲醇为色谱纯，美国Fishers公司生产；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。血样由我院肾移植科提供。　　1.2方法　　1.2.1色谱条件　　色

7、谱柱：PA对照品13.4mg，置10mL量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，配制成1.34g/L的对照品贮备液。精密吸取MPA对照品贮备液，用甲醇稀释配成不同浓度的MPA对照品溶液系列，置4℃冰箱保存备用。　　2结果　　2.1专属性和选择性　　在本实验条件下，MPA能够与MMF的体内代谢物以及血浆中内源性物质实现较好分离，肾移植术后其他常用免疫抑制剂如环孢素、它克莫司、甲基强的松龙、硫唑嘌呤对测定没有干扰。色谱图见图1，MPA保留时间约为10.36min。　　2.2标准曲线　　取空白人血浆0.3mL，分别加入MPA对照品溶液适量，精密配成质量浓

8、度为0.80、1.61、3.22、6.44、12.88、25.77、51.54mg/L的对照品血浆，按“样品预处理方法”操作，以MPA峰面积A为横坐标，MPA浓度C