高效液相色谱法测定注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B含量

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1、高效液相色谱法测定注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B含量【中图分类号】R28【文献标识码】A【文章编号】1672-3783(2013)11-0431-01【摘要】本研究建立了一种测定注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B的含量的高效液相色谱方法(HPLC)。主要方法为色谱柱岛津C18反相柱(5um,100A250mmX46mm)；柱温度30摄氏度；紫外检测器；流动相：甲醇-乙睛-甲酸-水(30：10：1:59)；流量：1.OmL/min；检测波长286nm；进样量20ulo结果表明，丹参多酚酸盐中丹酚酸B的平均含量0.8181mg/

2、ml,加样提取平均回收率为99.03%,符合分析实验要求。该方法结果稳定，简单可靠且重复性好，可广泛应用于丹参多酚酸盐中丹酚酸B的含量的测定。【关键词】高效液相色谱法；丹参多酚酸盐；丹酚酸B；含量测定注射用丹参多酚酸盐属于中药处方药，其80%为丹参乙酸镁。临床上用于治疗心绞痛、冠心病和心血管内科病等疾病[1-2],具有通脉养心、活血化瘀、养血安神、活血消肿等功效。注射用丹参多酚酸盐的主要的活性成分丹参素、原儿茶醛、原儿茶酸、咖啡酸、迷迭香酸、异阿魏酸、紫草酸以及丹酚酸A、B.C、E等。注射用丹参多酚酸盐的质量控制主要

3、是以酚酸B的含量作为质控指标[3-5]o目前，还未见对注射用丹参多酚酸盐的丹酚酸B活性成分含量控制的报道。本文建立了高效液相色谱法测定注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B含量的方法，用以测定该药品的质量。一、试验器材与方法1•试验仪器与试剂岛津高效液相色谱仪（LC-15C,四元泵，氛灯监测，可控温度，C18色谱柱）；注射用丹参多酚酸盐（生产厂家：上海绿谷制药有限公司，规格：每瓶装量50mg,批号：13032821）；丹酚酸B标准品（中国药品生物制品检定所提供，批号：111562-200302）；甲醇、乙睛为色谱纯（国药）;水

4、为重蒸馆水；甲酸为分析纯（国药）。2•色谱分析条件C18反相柱（5nm,100A250mmX46mm）；柱温度30摄氏度；紫外检测器；流动相：甲醇-乙睛-甲酸-水（30：10：1:59）；流量：1.OmL/min；检测波长286nm；进样量20u103.试验方法（1）溶液的配制1）标准品品溶液的配制精密称取丹酚酸E标准品5mg,定量于50ml容量瓶中，加水定量到刻度值，摇匀后精密量取5ml溶液置于50ml容量瓶中，加水定量到刻度值，摇匀，既得10mg/L的标准品溶液。2)供试品溶液的配制精密称取注液用丹参多酚酸盐5m

5、g,定量于50ml容量瓶中，加水定量到刻度值，摇匀，即得供试品溶液。3)对照品溶液的制备将2)中的丹参多酚酸盐换为等量的纯水，配置方法与2)相同。(2)检测方法设置好色谱条件后，吸取过微滤膜的上述溶液各20P1,分别注入高效液相色谱仪，进行色谱分析，采用外标法以峰面积计算样品的含量，重复5次。(3)标准曲线的制备精密量取10、20、40、80、lOOul的10mg/L的丹酚酸B标准品溶液，置于5个lml离心管中，用纯水定量到lml,混匀后过微滤膜，然后分别进样，根据色谱图，以色谱峰面积对成分浓度作回归统计。(4)丹酚

6、酸B含量试验丹酚酸B供试品溶液和对照品溶液的过微滤膜后，分别进样，按上述方法操作重复6次，测定注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B的含量。(2)加样回收率试验取丹酚酸B供试品溶液10ml,共6份，分别加入丹酚酸B标准品适量，精按含量测定方法测定最终丹酚酸B的含量,进行回收率计算。二、结果(1)丹酚酸B含量测定结果根据(2)的方法，测得丹酚酸B的含量见表1。(2)加样回收率试验结果丹酚酸B加样回收率试验结果见表2,从表2中可以看出，丹酚酸B的回收率为99.03%,符合分析要求。三、讨论(1)色谱条件的选择在2005版《中国药典

7、》中，丹参片质量标准测定的色谱条件为C18反相硅胶柱，流动相根据实际情况来定，通过多次试验发现，甲醇、乙騰为色谱纯(国药)、甲酸、水为重蒸馆水(30：10：1：59)的条件下，分离效果最好，而且流动相中存有甲酸时的柱峰形明显优于无甲酸的峰形，因此，确定高效液相色谱分析注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B含量测定的流动相为甲醇、乙睛为色谱纯(国药)、甲酸、水为重蒸馄水=30：10：1：59o(1)丹参多酚酸盐中丹酚酸B研究小结注射用丹参多酚酸盐的主要活性成分是水溶性成分，如果以药材的投入量来控制药品质量，会因为药材品种、产地以

8、及加工条件等的不同而受到很大的影响，最终导致药品中有效成分的含量不确定。目前，关于注射用丹参多酚酸盐中丹酚酸B的质控标准未见报道，本文建立了测定丹酚酸B的反相高效液相色谱法。从测定结果看，此法操作简便、灵敏度高、结果准确，可用于丹参多酚酸盐中丹酚酸B的测定。参考文献[1]税丕先庄元春，何兵，等.高效液相色谱测定丹参滴注液中丹酚酸E含量[J]•时