高效液相色谱测定丹参滴注液中丹酚酸b含量论文

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1、高效液相色谱测定丹参滴注液中丹酚酸B含量论文税丕先庄元春何兵朱烨【摘要】目的建立一种用高效液相色谱（HPLC）法测定丹参滴注液中丹酚酸B的含量的方法。方法色谱柱DikmaKromasilC18(5μm,100A250mm×4.6mm)；流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；流量为0.8ml·min-1；检测波长286nm；柱温30℃；进样量20μl。结果丹酚酸B的加样提取平均回收率为99.03％，RSD为1.02％，重复性实验的RSD为1.8l％。结论该方法简便可靠，结果稳定，重复性好，该方法可用于测定丹参滴注液中丹酚酸B的含量。【关键词】丹酚酸B含量测定高效液相色谱

2、法丹参滴注液丹参滴注液收载于国家中成药标准汇编内科心系分册，由丹参中提取的水溶性化合物总丹酚酸制得。总丹酚酸具有抗肝纤维化、抗动脉粥样硬化和改善记忆功能障碍等作用［1］，由丹参素、丹酚酸A、B、E.freeleleon色谱工作站）。丹酚酸B对照品(中国药品生物制品检定所提供。批号：111562-200302)，丹参滴注液（安徽华源生物药业有限公司生产。规格：250ml，16g。批号：061112，061115，061118，061120，061201)。甲醇、乙腈为色谱纯(天津四友公司)，水为重蒸馏水，甲酸为分析纯。1.2色谱条件DikmaKromasilC18(5μm,100A25

3、0mm×4.6mm)；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)；流量：0.8ml·min-1；检测波长286nm；进样量20μl。2方法与结果2.1溶液的配制2.1.1对照品溶液的配制取丹酚酸B对照品约5mg，精密称定，置50ml量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，得10mg·L-1的对照品溶液。2.1.2供试品溶液的配制精密量取丹参滴注液(批号061112)10ml，置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。2.1.3阴性样品溶液的制备按丹参滴注液制备方法和“2.1.2”项制得不含丹参的阴性对照品溶液，备用。2.2测定

4、方法精密吸取上述供试品溶液与对照品溶液各20μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算样品的含量。2.3方法学验证2.3.1标准曲线的制备精密称取丹酚酸B对照品适量，配成1g·L-1的标准储备液；分别吸取10，20，40，80，100μl分别置于5个1ml量瓶中，以水稀释至刻度，混匀后分别进样20μl，记录色谱图见图1。以色谱峰面积(A)对成分浓度(C)作回归统计，回归方程为：A=-9863.5+13282.6C，r=0.9896，线性范围12.56～142.40mg·L-1。2.3.2稳定性考察与精密度实验取浓度为812.64mg·L-1的供试品溶液分别在0，2

5、，4，6，8h进样，测得丹酚酸B供试品的峰面积RSD为1.06％，表明供试品溶液在8h内稳定。取某一浓度(812.64mg·L-1)供试品溶液，连续进样5次，测得进样精密度RSD为0.97％。2.3.3重复性实验取同一批号的丹参滴注液6份，按上述方法操作，测定丹参滴注液中丹酚酸B的含量，RSD为1.81％。结果表明重复性良好。a对照品b空白c丹参滴注液1.丹酚酸B图1HPLC图（略）2.3.4加样回收率实验取同一批号丹参滴注液(含量为812.6mg·L-1)6份，每份约10ml，精密量取，分别加入丹酚酸B对照品适量，精密称定，按含量测定方法测定，计算回收率(见表1)。可见，丹酚酸B的

6、平均回收率为99.03％(RSD=1.02％)，符合分析方法的要求。表1加样回收率实验结果（略）2.4样品含量测定取批号分别为061112，061115，061118，061120，061201的丹参滴注液适量，按“2.2”项下操作，测得丹酚酸B的含量见表2。表2样品含量测定（略）3讨论3.1溶剂的选择本实验比较了丹酚酸B在50％甲醇与水中的稳定性，结果均在8h内稳定，而因水价廉易得，故选用水为溶剂。3.2色谱条件的选择《中国药典》2005版，丹参片质量标准提供的色谱条件中，色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。根据单位实际情况，采用不同比例的甲醇-水、甲醇-水-甲酸、乙腈-水-甲

7、酸为流动相进行测试，发现乙腈的洗脱效果优于甲醇，流动相中存有甲酸时的柱峰形明显优于流动相中存有乙酸时的峰形，故选择甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)为流动相。【