响应面法对超声波提取藤茶二氢杨梅素工艺的优化

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1、响应面法对超声波提取藤茶二氢杨梅素工艺的优化梁琍，邱岚，张良（铜仁学院生物与化学工程系／梵净山野生动植物资源保护与利用研究中心／梵净山特色动植物资源重点实验室，贵州铜仁５５４３００）摘要：通过响应面分析法对超声波提取梵净山野生藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）二氢杨酶素的工艺条件进行优化。以乙醇体积分数、料液比、提取时间为影响因素，在单因素试验的基础上，采用３因素３水平响应面分析法，根据Ｂｏｘ－Ｂｅｎｈｎｋｅｎ中心组合试验设计原理，以二氢杨酶素提取率为响应值，进行响应面分析，优化超声提取梵净山野生藤茶中二氢杨梅素的条件。结果表明，超声波提取藤茶中二氢杨梅素最佳工艺条

2、件为乙醇体积分数５１．００％、料液比１∶２６．００（ｇ∶ｍＬ）、超声波时间４０．００ｍｉｎ，在此条件下二氢杨梅素的提取率为２８．４１％，回归模型预测的二氢杨梅素提取率为２８．６１％，经验证ＲＳＤ为１．１６％，拟合度较好，说明响应面法优化超声提取藤茶二氢杨梅素的工艺条件稳定可行。..关键词：藤茶（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ）；二氢杨梅素；超声波提取；响应面分析法中图分类号：Ｓ５６７．５＋３；Ｒ２８４．２文献标识码：Ａ：０４３９－８１１４（２０１５）０２－０416－０5ＤＯＩ：１０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ０４３９－８１１４．２０１５．０２．０40藤茶属葡萄科

3、（Ｖｉｔａｃｅａｅ）蛇葡萄属（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓ），学名为显齿蛇葡萄（Ａｍｐｅｌｏｐｓｉｓｇｒｏｓｓｅｄｅｎｔａｔａ），俗称甜树茶、甜茶藤等，是一种多年生的藤本植物，生长在海拔４００～１３００ｍ的山坡、林中、河滩等阴湿和肥沃的土壤中，是一种典型的药食两用植物［１］。藤茶中含有多种化学成分，包括水分、蛋白质、维生素、多酚和黄酮等，其中黄酮类化合物具有最重要的药理作用，而二氢杨梅素是其中最重要的黄酮类化合物，藤茶系目前国内外发现的二氢黄酮类化合物中含量最高的植物［２］，经试验证明，二氢杨梅素具有抗氧化、镇痛、止咳、广普抑菌、保肝护肝、降血糖、降血脂、增强人体免疫力以及抑制肿瘤等多种功效［

4、３］，具有很高的应用价值。梵净山位于贵州省东北部江口、印江和松桃３县交界之处，总面积５６７ｋｍ２，主峰凤凰山海拔２５７２ｍ，是武陵山系最高的山体，是一个以珍稀植物和动物为主的国家级自然保护区。１９８６年被联合国教科文组织批准接纳为世界“人与生物圈”保护区网的成员［４］。该保护区植被类型多样，主要有针叶林、阔叶林、竹林、灌丛、沼泽５个类型［５］，植物资源极为丰富，达１８００种［４］，是非常宝贵的药用植物资源库。目前关于梵净山野生藤茶二氢杨梅素的提取尚未见报道。本研究以梵净山野生藤茶为原料，在超声波辅助提取藤茶中二氢杨梅素的基础上，采用Ｂｏｘ－Ｂｅｈｎｋｅｎ响应面法对提取条件进行优化，为开

5、发梵净山野生藤茶及其综合利用提供依据。１材料与方法１．１材料与仪器试验所用藤茶采自梵净山，将藤茶在６０℃下烘干，经高速万能粉碎机粉碎，过４０目筛，将其装于干燥试剂瓶，贴上标签作为待测样品。主要试剂：二氢杨梅素标准品（纯度＞９８％，上海融禾医药科技有限公司）；９５％乙醇［分析纯，重庆川东化工（集团）有限公司］；无水三氯化铝（天津市博迪化工有限公司）等。主要仪器：ＧＵＴＥＬ超声波清洗器（上海冠特超声仪器有限公司）；１０１－３型电热鼓风干燥箱（北京科伟永兴仪器有限公司）；ＦＷ８０型高速万能粉碎机（北京科伟永兴仪器有限公司）；ＫＱ－Ｃ型玻璃仪器气流烘干器（巩义市予华有限责任公司）；电子分析天平

6、（奥豪斯仪器上海有限公司）；ＳＨＺ－ＤＩＩＩ予华牌循环水真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；Ｔ６型新世纪紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）等。１．２试验方法１．２．１标准曲线的绘制准确称取二氢杨梅素标准品５．２ｍｇ，用９５％的乙醇定容到５０ｍＬ容量瓶中揺均，分别吸取溶液０、０．２５、０．５0、０．７５、１．００、１．２５ｍＬ置１０ｍＬ容量瓶中，精确加入质量分数为５％的ＡｌＣｌ３溶液３ｍＬ，用９５％的乙醇溶液定容到１０ｍＬ，揺均后放置４０ｍｉｎ，在３１５ｎｍ的波长下测定吸光度［６］，以标准溶液的含量为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线（图１），得到的回归方程为：Ａ＝７８

7、．６８６ｘ＋０．００６７，Ｒ２＝０．９９８９（ｎ＝５）。１．２．２藤茶中二氢杨梅素含量的测定准确称取１ｇ藤茶粉末放入锥形瓶中，按１∶２０（ｇ∶ｍＬ，下同）的料液比加入５０％的乙醇浸泡１０ｍｉｎ，放入超声波功率８０Ｗ处理４０ｍｉｎ吸取提取液抽滤。将趁热抽滤的提取液装于大试管中，抽取０．１ｍＬ于１０ｍＬ的容量瓶中，用９５％的乙醇定容至刻度摇匀，抽取１ｍＬ于另外的１０ｍＬ容量瓶中，加入５％的ＡｌＣｌ３３ｍＬ，用９５％的乙醇定容至刻度揺匀，同时做空白液