大黄对慢性肾功能不全大鼠保护机制的研究

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1、大黄对慢性肾功能不全大鼠保护机制的研究【摘要】目的观察大黄对慢性肾功能不全大鼠肾功能及肾组织TGF-01和smad7表达的影响。方法采用腺嘌呤法建立大鼠慢性肾功能不全模型，治疗组予以大黄（4g/kg/d）灌胃。治疗4周后，检测各组大鼠的24小时尿蛋白定量、肾功能，通过组织学及蛋白印记观察肾组织TGF-P1和smad7的表达。结果治疗组大鼠的24h尿蛋白定量、肾功能明显增加（P＜），而治疗组大鼠24h尿蛋白定量、肾功能较非治疗组减少（POo非治疗组大鼠肾组织TGF-Pl、smad7表达较正常组明显增加（P＜）。结论大黄可降低慢性肾功能不全大鼠24小时尿蛋白、肾功能水

2、平，抑制肾组织TGF-P1和smad7表达。大黄对慢性肾功能不全的保护机制可能与降低肾脏TGF-P1和smad7表达有关【关键词】大黄；慢性肾功能不全；腺嘌呤；转化生长因子-01;smad[Abstract]ObjectiveTostudytheeffectofDaiHuangonglomerulosclerosisandexpressionofTGF-Plandsmad7inratswithCRF.MethodsRatedintocontHuangtreatheratsinthrolgroup,nedgroupwitelattertwoottreatedgh20

3、ratsinegroupsweresweredividroupandDaiachgroup.TintragastricofAdenine.thetreatedgroupwasfedwithDaiHuangatadoseof4g/(kg•d)for4weeks.Urineproteinexcretion，ureanitrogenandcreatininewasmeasured.TheexpressionofTGF--3landSmad7wasmeasured.ResultsComparedwiththecontrolgroup,thenottreatedgroups

4、howedhigherurineproteinexcretion,ureanitrogen,creatinexpressionofTGF-3landsmad7.ConclusionDaiHuangcandiminishurineproteinexcretionandpreventglomerulosclerosisinsubtotallynephrectomizedrats.ThisprotectiveeffectispresumedtobeassociatedwithitseffectonexpressionofTGF-3landSmad7.[Keywords]

5、DaiHuang;Chronicrenalfailure;Adenine:TGF-3l;Smad7大黄为寥科植物掌叶大黄，现代药理学研究发现，大黄有抗血小板聚集、降血脂、清除氧自由基、提升超氧化物歧化酶(SOD)的活性，减轻免疫炎症反应的功效，同事具有泻热通便、解毒消痈、行瘀通经功效。我们通过观察大黄对慢性肾功能不全大鼠的治疗，观察其对尿蛋白排泄、肾功能的影响；并观察其对肾组织中转化生长因子31(TGF-01)、smad7的蛋白表达及肾脏病理变化的影响，探讨大黄对慢性肾功能不全的疗效及作用机制。1材料与方法材料湖北产中药材大黄。腺嘌呤(产品批号XX109)o兔抗T

6、GF-01、Smad7抗体；EnVision免疫组化试剂盒；BCA试剂盒。实验动物分组和模型建立雄性SD大鼠60只，7周龄，体重190±20g。适应性饲养1周，随机分为正常组20只和腺嘌呤组40只。腺嘌呤组每日腺嘌呤300mg/kg灌胃，6周后以代谢笼留取24小时尿液，眶内静脉采血，测定24小时尿蛋白定量、血尿素氮、血肌酐。检测发现全部造模成功。随机分为2组：非治疗组20只，治疗组20只。治疗组大鼠每日给予黄葵胶囊[2g/kg•(!]灌胃，同时正常组和非治疗组给予等量生理盐水灌胃。4周后全部大鼠以代谢笼留取24小时尿液，眶内静脉采血，测定24小时尿蛋白定量、血尿素

7、氮及肌酐。大鼠处死后取部分肾组织置于10%中性甲醛中固定，部分肾组织液氮保存用于蛋白印迹杂交方法(Westernblot)检测蛋白表达。实验期间大鼠自由饮水、进食。检测方法尿蛋白定量及肾功能测定病理形态学观察肾组织经10%中性甲醛固定，梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸腊、包埋、切片，厚3附，行HE染色，观察肾小球硬化及肾间质纤维化的程度。蛋白印记分析各组取约100mg肾组织置于1ml裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂PMSF100ug/ul,aprotininlug/ml，leupeptinlug/ml）,匀浆后冰浴30分钟，然后4度12000g离心20分钟。提取蛋白后用BC

8、A法测量蛋