微生物来源的次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶抑制剂2264 A和B的研究

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1、微生物来源的次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶抑制剂2264A和B的研究作者：林洁可爱兵张雪莲郑智慧朱京童路新华*李业英崔晓兰石英张华贺建功【摘要】利用自建的快速高效的次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶(Inosinemonophosphatedehydrogenase，IMPDH)抑制剂的高通量筛选模型，筛选分离得到两个活性化合物226A和B，通过对其紫外、质谱、核磁等理化数据的分析确定226A为cyclopenol，226B为viridicatol。226A和B对IMPDH的IC50分别为、μmol/L；体外脾淋巴细胞增殖实验显示226

2、A和B分别在和μmol/L浓度下可完全抑制由ConA活化的脾淋巴细胞增殖，表明226B在分子水平和细胞水平均表现出较好的免疫抑制活性，226A的活性相对较弱。【关键词】次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶；免疫抑制剂；Cyclopenol；ViridicatolABSTRACTInosinemonophosphatedehydrogenase(IMPDH)isanessentialratelimitingenzymeinthepurinemetabolicpathway,catalyzingthedenovosynthesiso

3、fpurinenucleotidesrequiredforlymphocyteproliferation.IMPDHhasthereforebeenanattractivetargetfordevelopingimmunosuppressivedrugs.ThisinvestigationwastodiscovernewIMPDHinhibitorsfrommetabolitesofmicroorganism,andtwoactivecompounds26AandBwereandBwereidentifiedtobe

4、cyclopenolandviridicatolbythEirphysicochemicalproperties,MS,13CNMRand1HNMRanalysis.IC50of26AandBμmol/Landμmol/LtoIMPDH,respectively,andtheycouldcompletelyinhibitthespleenlymphocytesproliferationstimulatedbyConAat22.μmol/Land5.μmol/LinandBshowedmoderateinhibit

5、oryactivitytoIMPDHandspleenlymphocytesproliferation.KEYWORDSInosinemonophosphatedehydrogenase;Immunosuppressant;Cyclopenol;Viridicatol免疫抑制剂在临床上应用广泛，不仅能够有力地推进临床器官移植的实施，延长移植物的存活率，改善器官移植患者的生存质量，同时也为许多自身免疫性疾病如红斑狼疮、类风湿病等的治疗开辟了广阔的应用前景。但是现有的免疫抑制剂在临床应用中仍然存在不同程度的毒副作用、治疗

6、对象和方案较局限等缺点，普遍存在一些严重不良反应，如肝毒、肾毒、神经毒性、消化道反应、内分泌系统失调、皮肤损坏和致癌作用等。因此开发全新的低毒、高效免疫抑制剂很有必要［1，2］。次黄嘌呤一磷酸盐脱氢酶(inosinemonophosphatedehydrogenase，IMPDH)是鸟嘌呤核苷酸经典合成途径的限速酶，IMPDH受抑制将导致鸟嘌呤核苷酸缺乏，DNA合成受阻，使细胞静止于G1期，因此其活性与细胞增殖紧密联系。这种酶的抑制剂被发现具有抑制免疫力的作用［3，4］，因此IMPDH成为免疫相关疾病药物的重要靶点。

7、为了研究和发现更加有效和低毒的免疫抑制药物先导化合物，本研究利用以IMPDH为靶点的高通量筛选模型从微生物的代谢产物中进行药物筛选，并从阳性菌株2264的发酵产物中分离得到活性化合物226A和B。本文报道了226A和B的筛选、发酵、分离纯化、结构鉴定及其生物学免疫活性。1材料与方法筛选用微生物的菌株真菌菌株2264由本室从5000株真菌中筛选得到。试剂及仪器人类II型IMPDH表达质粒由本实验室构建；DH5α由本实验室保存；NADH、NAD和IMP(Sigma公司)；BABL/C小鼠，雌性，6周龄(河北医科大学实验动

8、物厂)；RPMI1640(GIBCO公司)；十二烷基硫酸钠(LaurylSulfateSodium，SDS)(GIBCO公司)；新生牛血清(杭州四季青)；噻唑蓝(ThiazolylBlue，MTT)(Sigma公司)；青霉素、链霉素(华北制药股份有限公司)；其余化学试剂均为分析纯或色谱纯试剂。Victor1420多标计数仪(美国PE)；中压层