微生物来源的Xa因子抑制剂F022172的研究

《微生物来源的Xa因子抑制剂F022172的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、微生物来源的Xa因子抑制剂F022172的研究作者：路新华郑智慧马瑛石英董悦生任晓穆栋张华贺建功【摘要】利用一种由本中心建立的Xa因子抑制剂高通量体外筛选模型，从大量真菌菌库及其来源的代谢产物中筛选到了一株可产生阳性活性化合物的菌株F02ZA2172，该菌株的发酵液经有机溶剂提取、硅胶柱色谱、ODS柱色谱、SephadexLH20柱色谱及HPLC制备分离，得到F022172A、B和C三个活性化合物。经紫外、质谱、核磁等理化数据分析，确定这三个化合物分别与已知化合物6epiophiobolinK、ophiobolinK和ophiobolinG的结构

2、相同，但该类化合物对Xa因子的抑制活性至今未见报道。【关键词】微生物Xa因子抑制剂二倍半萜F022172,factorXainhibitorsfrommetabolitesofmicroorganismsABSTRACTAhighthroughputscreeningmodelwasestablishedforscreeningfactorXainhibitorsfromthousandsofstrainsoffungi,asaresult,astrain,F02ZA217withpotentsuppressionactivitywasisolated.

3、Theculturebrothofitwasprocessedbysolventextraction,silicacolumnchromatography,SephadexLH20columnchromatographyandODSHPLCpreparationtoobtainthreepureactivecompoundsnamedF022172A,BandC.ThEirchemicalstructureswereelucidatedasthecompoundsnamedepiophiobolinK,ophiobolinKandophiobolin

4、GbyphysicochemicalpropertiesandspectraldataofUV,MS,1HNMRand13CNMRrespectively.ThecompoundsarereportedasfactorXainhibitorsforthefirsttime.KEYWORDSMicroorganisms;FactorXainhibitor;Sesterterpenes血栓的形成是心血管疾病(如心肌梗死、中风、深度静脉血栓、肺栓塞等)重要致病因素，抗血栓治疗一直是这类疾病抢救措施及预防策略的核心，其中抗凝血是抗血栓治疗的重要方法之一，因此，寻

5、找更加安全、高效的抗凝血药物在临床治疗上具有重要的意义。Xa因子(factorXactivated，factorXa)是一种丝氨酸蛋白酶，位于血液凝集级联的上游，处在连接内源性和外源性激活途径共同通路的中心位置，Xa因子抑制剂既能阻断内源性凝血亦能抑制外源性凝血的发生［1］。Xa因子是凝血酶生成的限速成分，由于在血液凝集级联反应过程中还存在生物信号的放大，估计一个Xa因子抑制剂分子能抑制138个凝血酶分子的生理效果，Xa因子抑制剂可能比凝血酶抑制剂更为有效［2］。Xa因子只单纯促进凝血，没有凝血酶抑制剂的副作用，因此，Xa因子抑制剂成为近年来抗凝血药物研究的

6、热点之一，有些药物已经上市［如Organon公司和SanofiSynthelabo公司共同开发的磺达肝素钠(fondaparinuxsodium，商品名：方达帕鲁)于XX年12月在美国获得FDA批准［3］］或正在开发中［4］。本实验室建立了一个快速的高通量筛选方法，从大量土壤真菌代谢产物中筛选Xa因子抑制剂，筛选得到阳性菌株F022172。本文报道其发酵、分离、结构鉴定和生物学活性。1材料与方法筛选用微生物的菌株真菌菌株由本中心从云南和新疆采集的土壤中分离得到。试剂及仪器Xa因子和底物MCA(BocIleGluGlyArg7amido4m

7、ethylcoumarinhydrochloride)购自美国Sigma公司；色谱乙腈购自Merck公司；Victor2多标计数仪(美国PE公司)；中压层析系统(德国BUCHI公司)；高效液相系统(美国Waters公司515泵和PDA检测器)；高效液相柱PhenomeneC18(20mm×250mm，10μm)；核磁共振仪00MHz(Inova)；质谱仪(AutospecUltima)。Xa因子活性测定方法活性测定方法由本中心建立，原理是Xa因子可以水解特定的荧光标记多肽底物，通过荧光值的变化计算抑制剂对酶的抑制活性。活性测定反应在96孔板进行，样品孔中加

8、入/LTris(，10mmol/LNaCl，10mm