肺巨噬细胞移植治疗

《肺巨噬细胞移植治疗》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、肺巨噬细胞移植治疗(PMT)PulmonaryMacrophageTransplantationTherapy专业：细胞生物学姓名：李倩倩导师：毕秀丽hPAP遗传性肺泡蛋白质沉积症简介基因治疗摘要实验方法实验过程和结果阐述相关基因治疗案例hPAPHereditarypulmonaryalveolarproteinosis:即hPAP,遗传性肺泡蛋白质沉积症纤维支气管镜活检病理学检查示肺泡腔内充满PAS阳性的粗颗粒状物质,肺泡灌洗液可见大量无定形的碎片,常伴PAS染色阳性的巨噬细胞。在hPAP中，肺泡充满了表面活性物质，肺生成这种物质来降低表面张力，保持肺泡开放状态。hPA

2、P患儿具有CSFR2RA或CSFR2RB突变。这些突变降低了肺泡巨噬细胞清除这些孩子肺部表面活性物质的能力。表面活性物质累积于肺部，填满肺泡会造成呼吸困难或呼吸衰竭。对于这些孩子当前唯一的治疗方法就是在全身麻醉情况下完成侵袭性的洗肺程序。但其效应是暂时的，必须频繁重复操作，给受累患儿造成生活质量问题。GM-CSF：粒细胞集落刺激生物因子，能够刺激骨髓细胞对肺泡细胞的胞饮以及对面面活性物质的降解。GM-CSF受体即CSFR的缺陷或者GM-CSF抗体均可导致hPAP。GM-CSF的受体为CSFR,CSFR由α和β链组成，编码α和β的基因分别为csf2ra和csf2rb。csf

3、2ra和csf2rb突变CSFRB表达缺陷阻断GM-CSF信号转导巨噬细胞对肺泡表面蛋白清除能力下降hPAP也就是说，hPAP患者肺泡血清中GM-CSF升高，而GM-CSF抗体为阴性基因治疗简介基因治疗（genetherapy）是指将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病，以达到治疗目的。也就是将外源基因通过基因转移技术将其插入病人的适当的受体细胞中，使外源基因制造的产物能治疗某种疾病。基因治疗的特异性强，其药物本质为DNA，在体内表达为蛋白质，且基因治疗作用有持续性。基因治疗的策略有基因替代，基因修正，基因抑制，基因增强和免疫调节。摘要：

4、以往用骨髓移植(BMT)来治疗hPAP小鼠模型，会破坏现有骨髓。最近发现定居巨噬细胞可以自我维持，不需来自骨髓的细胞直接再生。于是作者想到测试新型巨噬细胞移植疗法。结果表明，自然的健康巨噬细胞和基因矫正巨噬细胞同样能够很好地发挥作用纠正小鼠的hPAP。在小鼠基因Csf2rb丧失表达、模拟hPAP的小鼠中，研究人员利用一种病毒载体将矫正Csf2rb基因传递到取自动物的异常肺泡巨噬细胞中。随后将基因矫正细胞直接灌注到小鼠的肺部。这种方法使得疾病相关生物标记物正常化，至少在一年内降低了疾病死亡率。实验方法支气管肺泡灌洗液和细胞收集、处理ELISA,QuantitativeRT-

5、PCRBonemarrowderivedmacrophages(BMDMs)Colonyformingcell(CFC)assay集落形成实验SurfactantClearanceAssayPulmonarymacrophagetransplantation(PMT)Flowcytometry流式细胞术STAT5phosphorylationindexassayWesternblottingMicroarrayanalysis微阵列分析LocalizationofPMT-derivedcellsaftertransplantationLentiviralvectors（慢

6、病毒载体）,anddifferentiationandexpansionofmacrophages实验过程简介三种小鼠模型1）WTmice(windtype)2)KOmice(Csf2rb-/-)3)KO+PMTmice(pulmonarymacrophagetransplantation)WTHSPCsisolatedexpandeddifferentiatedintomacrophagestransplantationhPAPmarkers：1）PAS染色阳性ORO染色阳性2）BALturbiditySP-Dconcentration3）BAL中，GM

7、-CSFM-CSFCSF1MCR1mRNAforPU1,PPARɣABCG1↓结果KO小鼠可以作为人类hPAP患者的模拟生物(a)TypicallungpathologyandidenticalpulmonaryhistopathologyinaKOmouse.PASstain.(b)Photographsof‘‘ilky’’appearingBALfroma14month-oldKOmouseandnormal-appearingBALfromanage-matchedWTmouse(d)BALfluidbioma