牛初乳中乳铁蛋白的分离纯化与免疫功能检测

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1、维普资讯http://www.cqvip.com2082005,Vo1．26,No．7※营养卫生牛初乳中乳铁蛋白的分离纯化与免疫功能检测叶震敏1，王志耕一，余为一2(1．苏州大学医学院，江苏苏州215007；2．安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥230061)摘要：牛初乳经离心、盐析后获得乳铁蛋白粗提物，通过CM—SephadexC50离子交换色谱和Heparin．SepharoseCL一6B亲和色谱纯化获得纯度分别为76．98％和92．75％的乳铁蛋白，经SDS．PAGE检测乳铁蛋白存在分子质量分别为76000Da和78000Da的两种异构体，免疫电泳说明提纯样品与乳铁蛋白标准品

2、具有相同的免疫原性。小白鼠喂养和免疫实验说明乳铁蛋白可提高机体免疫功能。关键词：初乳：乳铁蛋白；分离提纯；免疫功能IsolationandPurificationofLactoferrininBovineColostrumsandDelectionofItsIm／iluneFunctionYEZhen—min，WANGZhi—geng一，YUWei—yi(1．CollegeofMedicine，SooChowUniversity，Suzhou215007，China；2．ColegeofAnimalScience，AnhuiAgriculturalUniversity，Hefei2

3、30061，China)Abstract：Thelactoferrinwaspurifiedbycenlrifugationandam．momumsulfatepreeipitationfromthebovinecolosmnns．ThepurityoflactoferrinafterCM—SephadexC50ion—exchangechromatographandHeparin—SepharoseCL-6Baffmitychromato-graphWas76．98％and92．75％respectively．Thetwokindsoflactoferrinisomerswere

4、assayedbySDS—PAGEandHPLCwiththemolecularweights76000Daand78000Darespectively．Thepurifiedsampleandstand~dlactoferrinshowedthesameimmunogensthrough．Theisolatedlactoferrinimprovedtheimmunefunctionsignificantlyinmiceexperiments．Keywords：colostrums；lactoferrin；isolationandpurification：immunefunctio

5、n中图分类号：$852．4文献标识码：A文章编号：1002．6630(2005)07．0208．04乳铁蛋I~l(Lf，lactoferrin)是一种主要存在于大多数初乳取自合肥奶牛场：CM．SephadeXC50树脂、哺乳动物乳汁中的铁结合性糖蛋白，它在增强机体免疫Heparin．SepharoseCL．6B树脂购自Pharmacia公司；能力，调节机体生理状态平衡，改善胃肠功能，抗菌、AKTA．FPLCunicom3．21、monosHR5／5高效液相色谱系抗病毒等方面起着重要作用⋯。乳铁蛋白己被广泛应用统购自Pharmacia公司；中分子量标准蛋白来自上海生于食品、医药、饲料

6、、生化以及化妆品领域。作为化所；乳铁蛋白标准品购自Sigma公司；弗氏佐剂自行纯天然功能因子，其开发利用已引起人们的高度关注制备；实验动物来源于安徽医科大学实验动物中心。【：】。本文建立了实验室分离提纯具有生物学活性的较高l_2方法纯度乳铁蛋白的技术路线和方法，并对其提高机体体液1．2．1粗提免疫的活性进行了验证性研究，以期为高纯度乳铁蛋白取中国荷斯坦奶牛产犊后24h内的牛初乳，4℃下工业化生产提供技术参考。4000g离心30min脱乳脂，调pH。至4．6，25℃下4000g离心30min去除酪蛋白后，用1材料与方法42％饱和(NH4)zSO,盐析后2000g离心20rain。1．

7、1材料取乳清即为乳铁蛋白粗提物。收稿日期：2004．10．27$通讯作者基金项目：安徽省“十五”农产品加工重大专项(01703004)作者简介：叶震敏(1977．)，博士生，主要从事肿瘤免疫研究。维普资讯http://www.cqvip.com※营养卫生2005,VoL26,No．72091．2-2离子交换色谱将透析的乳清样品加入平衡过的2×33cmCM．SephadexC50离子交换柱。分别用pH8．0含0、0．3、0．5、0．7mo1／LNaCl的0．05mol／