牛初乳中乳铁蛋白的分离和纯化

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1、维普资讯http://www.cqvip.com农品，盐斜枝ScienceandTechnologyofFoodIndustry三艺技◆◇徐丽萍(哈尔滨商业大学食品工程学院，黑龙江哈尔滨150076)擅要：利用超滤、盐析和层析三种方法，采用单因素实验和正交1材料与方法实验对酸牛乳清中的乳铁蛋白进行分离和纯化，得到盐1．1材料与设备析的最佳条件为：先以50％硫酸铵除去杂蛋白，然后在3O。C，pH8．5，8O％硫酸铵进行盐析。用CM—SephadexC一牛初乳国家乳品工程技术中心提供；标准乳铁100进行层析，进样量为2mL，洗脱液pH为7．4时可以得蛋白电泳级，SigmaCh

2、emicalCo．；CMSephadexC一到乳铁蛋白纯品。sDs—PAGE凝胶电泳结果表明，牛初乳中乳铁蛋白的纯度为92％，分子量大约为78000±100PharmaciaBiotech；火棉胶，磷酸二氢钠一磷酸氢2000Da。二钠缓冲液。关键啊：乳铁蛋白，牛初乳，分离，纯化，分子量电泳仪(ZY500)北京市君意机电技术公司制Abstract：Lactoferrinincolostrumwasseperatedandpurified造；数控计滴自动部分收集器(SBS一100)上海沪西bythecombinationofsuperfiltration，salting—ou

3、tandchromatography．andtheoptimalisolatingconditons分析仪器厂；小型离心机(LD5—10)北京医用离心wereobtainedbysinglefactorando~hogonal机厂；722光栅分光光度计上海精密科学仪器有限experiments，whichwere：precipitatetheimpureproteinby50％(NH404，saltoutat30。C，pH85公司；板式超滤器北京医用设备厂。with80％(NH4)2SO4，andeluteatpH7．4，andthepureIactoferrinwaso

4、btainedbvCM—SephadexC一1．2实验方法100．Theresultfr0mSDS-pAGEshowedthatthe1．2．1乳铁蛋白粗品的制备purityofthelactoferrinwas92％．andthemolecularweightwasabout78000~2000Da．通过超滤法制备乳铁蛋白的粗品，实验条件如Keywords：Iactoferrin；colostrum：seperation：purification；下，实验膜：CA膜(醋酸纤维素)；超滤装置：板式超molecularweight滤器；工作压力：0．15MPa；料液温度：4

5、0。C。取100OraL中图分类号：TS252．42文献标识码：B牛初乳，先用截流分子量为100000Da的超滤膜进行文章编号：l002—0306(2007)03—0170—03首次超滤，然后用截流分子量为50000Da的超滤膜对滤过液进行第二次超滤，最后用截流分子量为乳铁蛋白(Laetorerrin，Lf)是一种铁结合糖蛋白，10000Da的超滤膜进行浓缩，即得乳铁蛋白粗品。1．2．2乳铁蛋白的分离广泛存在于乳汁、唾液、泪液等外分泌液或血浆、中性粒细胞中I”。Lf是一种具有多种生物学功能的蛋白1．2．2．1杂蛋白的分离分别取试管，准确称量11份质，它能够参与铁的转运，对

6、肠中的铁离子具有增溶含乳铁蛋白粗品10g，加入适量磷酸盐缓冲液作用，而且具有广谱抗菌、抗氧化、抗癌、调节免疫系(pH8．5)，依据计算结果，缓慢滴加饱和(NH)2sO，使统等功能·31。由于乳铁蛋白具有广泛而独特的生物上述各管中硫酸铵浓度分别达到30％，35％，40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％，75％和8O％。于室学功能和理化特性，作为食品、医药等领域的新兴成员，正在受到越来越多的关注。随着乳铁蛋白作用、温下静置过夜，10000r／min下离心分离30min，将沉功能、机制的不断阐明和开发应用范围的不断扩大，淀物用pH7．4的磷酸盐缓冲液溶解，定容至

7、25mL，它在治疗、营养补充、食品等方面将有着广阔的应用分别测定其在475nm处的OD值。前景，因此，非常具有开发和研究价值。本文的目的1．2．2．2乳铁蛋白分离条件的确定根据单因素实验得出的最适硫酸铵、温度和pH，对盐析工艺参数采旨在研究从酸牛乳清中分离、纯化乳铁蛋白的最佳用IJ9(3)表进行正交实验，将沉淀收集，溶解，定容，条件，并对其进行定性和定量分析。测定其在475nm处的OD值，方法同前。因素水平表见表1。收稿日期：2006—12-181．2．2．3验证实验根据正交实验确定的盐析的最佳作者简介：徐丽萍，女，硕士，副教