乳铁蛋白的分离纯化以及免疫佐剂作用的研究

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1、摘要乳铁蛋白(Lacto向畦n，简称LF)是存在于哺乳动物外分泌液中的一种1}血红素铁结合糖蛋白，由转铁蛋白转变而来。1938年sorensenM和sorensensPL首次从牛乳中分离出来，1953年Polis等在制各乳过氧化物酶时得到了它的粗制品。1960年Johansson和Mon仃euil等从人乳中首次分离出LF。LF是一种多功能蛋白质，具有广谱抗菌、抗病毒感染作用；能调节体内铁的平衡；调节机体免疫功能，增强机体抗病能力；能同多种抗生素及抗真菌制剂协同作用，更有效地治疗疾病。本试验采用盐析和凝胶层析相结合的方法分离

2、纯化LF。首先将奶牛产犊后24h之内的新鲜初乳进行乳样前期处理，除去脂肪和酪蛋白，得到乳清；然后利用盐析的方法对乳清进行粗分离。硫酸铵浓度分别为30％～50％～80％，除去与LF分子量差异较大的蛋白质；然后选用sephadexG—100进行凝胶层析，在20℃条件下以o，2mL肺in的流速进行洗脱，洗脱液选用PH7．4的PBs；待出现峰值后收集样品，每管收集1mL；经sDs-PAGE测定，所得LF组分显示为单一区带，相对分子质量为90，000Da，LF精制品中LF的纯度为92％；利用分光光度法检测LF的质量浓度为101．73

3、峙，mL。本试验以蜂胶、左旋睬唑、复方中药等新型佐剂作为LF的对照，分别制成了添加不同佐剂的油乳剂疫苗和弱毒疫苗，将蛋用型雏鸡做为免疫对象，随机分成12组，每组10只，咀o．2mL，只为免疫剂量，分别在10日龄颈部皮下注射，同时采用clone30弱毒菌漓鼻、点眼作基础免疫。分别于免疫前、首免后5d、10d、15d、和二免后5d、10d、15d、20d、25d、30d、35d时，从各试验组中随机选取5只健康鸡无菌采集心血各O．5mL分离血清．采用p-微量血凝抑制试验检测新城疫HI抗体效价。结果显示，LF弗氏佐剂疫苗组的HI抗

4、体效价增长速度最快，持续时间最长；LF的免疫增强效果与蜂胶、左旋咪唑和复方中药差异不显著，与油乳剂疫苗、弱毒疫苗差异显著，与对照组差异极显著。说明LF具有较好的免疫增强作用，可以诱导体液免疫反应。关键词：乳铁蛋白；分离纯化；鸡新城疫：免疫AbstractLacto危rrin(LF)isonekindofnonhemeiron-bindinggiycoproteineXistingintheextemaIsecre廿onjuiceofm锄malwhjchischan譬edfromtransfe州n．In1938，Sorens

5、enMandsorensensPL厅rstis01atedLFfmmmilk．1n1953，Poliseta1．gotitscrudeproductwhenpreparing1actoperoxidase(LP∞．1n1960，JohallssonandM0ntreu．1etal-nrstis01atedLFfmmhumanm-1k．LFisonekindofmultifiJnctionalDroteinwhichhastheefrectofantibiosisa11daflti．viralinfection．LFcanr

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7、Itcanregu】a把jmmunefu力ctj叩丑J】ds吮门gthentbebodydjseaseresis诅11ce．1thastllesyne曙istice舒ectwitllantjbiotics柚dantjfungalpreparationwhichhelpthemtreatthediseasese娟cieml弘Theexperiment印pliedsaldn}outandgelchromatographytoisolateandpuriqLF，Firstlyt

8、hefbshc010s廿almilkwimin24ha船rbirm-giVingw鹊pre-仃ea他d．Fat锄dcaseinwasrelnovedalldmenlacto-semmwasgdnen．Thencmdes印arationoflacto-senImw雏donebymemethodofsalting—outtoremovetheproteinsignific鞠tlydi丘bremn_0mmolecularmassOfLF．Thedensitiesof釉moIliumsulfatewere30％，50％aIld80

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