高效液相色谱法测定人参渣中人参多糖的含量

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1、万方数据782·药学园地·高效液相色谱法测定人参渣中人参多糖的含量木海鸥金玉琴温州医学院附属第二医院温州325027吴煜浙江省温州市第三人民医院关键词人参多糖高效液相色谱法人参，别名为山参、园参，为五加科植物人参Panaxgin—sengC．A．Mey．的干燥根，其叶也入药，称为参叶。我国是世界上人参生产大国，其产量占全世界的60％，种植地主要分布于我国东北各省，辽宁、吉林有大量栽培，近年河北、山西、陕西、甘肃、宁夏、湖北等省区也有种植¨1。作为我国特产的珍贵药材之一，人参具有调节中枢神经系统、改善心脏功能、降血糖作用、增强机体的免疫功能、抗肿瘤、抗氧化等作用，因而

2、自古以来就被作为名贵的补品。人参以其特殊的医疗保健功能，得到充分的开发利用，如今人参加工产品种类越来越多，如人参保健品、人参药酒等，但是大量废弃的根渣中仍含有丰富的活性成分。人参多糖(ginsengpolysaccharide，GPS)作为人参的主要活性成分之一，具有提高肌体免疫力、抗肿瘤、降血糖以及调控血细胞生成的作用HJ。国内测定多糖含量常用硫酸．蒽酮和硫酸一苯酚分光光度法，但误差较大，现有的比色重现性差，受影响因素多，尤其蒽酮试液加热后对最大吸收峰影响较大。高效液相色谱法是在经典的液相色谱基础上发展起来的一种高效、高速、高灵敏度的分析方法，目前其应用已超过气相

3、色谱澍“。本文采用高效液相色谱法对人参渣中的人参多糖进行定量分析，为综合开发利用人参的新途径提供科学参考依据。1仪器与试剂Agilenttechnologiesl200型高效液相色谱仪(美国ASl·lent公司)；光电二极管阵列检测器；N2000色谱数据工作站；UV-2500型紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；TGL-16G高速冷冻离心机(香港力康发展有限公司)；KQ-250B超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。D一无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所，批号：1108332200302，供含量测定用)；甲醇(HPLC级，美国Tedia公司)；人参渣为保健品

4、公司产品加工后的人参渣废弃物。2方法与结果2．1波长选择称取D．无水葡萄糖对照品1．0mg，置于100ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，用紫外分光光度计在200—400nm波长范围内扫描，分析紫外吸收图谱可见，葡萄糖在214nm处有最大吸收峰，因此选择此处为检测波长。2．2色谱条件色谱柱Nova-PakCIB(150ram×3．9mmCol-umn，41xm，美国Wmem公司)；流动相为水-甲醇(1：1)，用磷酸调节pH值至3．0；流速为Iml／min；柱温30℃；检恻波长为214nm；进样量为20斗l。在上述色谱条件下，D一无水葡萄糖的保留时间为6．6

5、87min。2．3对照品溶液的制备精密称取一定量的经80℃干燥至恒重的D．无水葡萄糖对照品，加流动相制成浓度为10mg／ml的对照储备溶液。2．4供试品溶液的制备将人参渣经60℃减压干燥24小时后，粉碎、过筛，得到100目的人参渣粉。加适量纯净水常温浸泡1小时，加热至45。C，超声波功率200W，超声提取30min，过滤后将滤液浓缩至原体积的1／3，向浓缩液中加乙醇使含醇世达85％，静置12小时，离心(3000r／min)15rain，弃去上清液，取沉淀物于恒温干燥箱中干燥后即得多糖粗品。将所得多糖粗品溶于适量流动相，于100℃条件下水浴90min，得到供试品溶液。

6、2．5线性关系考察取对照储备液，依次稀释成浓度为0．5、1、2⋯468、lOmg／ml的溶液进行HPLC测定，以峰面积为纵坐标、溶液质量浓度为横坐标绘制标准曲线，求得回归方程为Y=95736X+482411，r2=0．9995(n=7)，结果表明葡萄糖质量浓度在0．5～iomg／ml范围内与峰面积线性关系良好。2．6精密度试验取对照储备溶液，将其稀释成浓度为0．2mg／ml的溶液，精密吸取20山，连续进样6次，测得葡萄糖峰面积的相对标准偏差(RSD值)为0．58％(n=6)，表明该法具有良好的精密度。2．7稳定性试验取供试品溶液，按进样色谱条件分别于0、4、8、12

7、、24小时测定葡萄糖峰面积，得到RSD值为0．96％，表明供试品溶液在24小时内稳定。2．8重复性试验精密称取人参渣粉6份，每份约59，按2．3项方法制备，置于100ml容量瓶中，加流动相至刻度，进样20“，用HPLC法测定每份样品中人参多糖的含量。结果测得lmg人参渣中人参多糖(以D-无水葡萄糖计)的平均含量为0．3802mg。RSD=1．68％，表明试验重复性好。2．9加样回收率试验精密称取人参渣粉6份，每份约509，按2．3项方法制备，置于100ml容量瓶中，加流动相至刻度，进样20m，用HPLC法测定。计算平均加样回收率为100．43％，其RSD值为1．