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1、反相高效液相色谱法测定三七花中人参皂苷Rb1的含量【关键词】三七花人参皂苷Rb1反相高效液相色谱法 Abstract:ObjectiveTogivethefoundationofqualitystandardofNotoginsengbud.MethodsRP-HPLCineRb1ofNotoginsengbud.ResultsThestabilitytimeethodethodaccordsent.ItcanbeusedindeterminingthecontentofRb1inNotoginsengbud. KeyC18100A5μm250mm×4.
2、6mm;试剂均为色谱纯。人参皂苷Rb1对照品(中国药品生物制品检定所,供含量测定用)。 2方法与结果 2.1色谱条件色谱柱AlltechPlatinumC18100A5μm250mm×4.6mm;流动相为乙腈-水(30∶70);检测波长为203nm。色谱图见图1~2。 2.2供试品制备条件的考察 2.2.1甲醇回流时间的考察考察了甲醇回流时间对人参皂苷Rb1提取的影响。结果见表1。依据结果,确定甲醇提取时间为4h。表1不同甲醇提取时间对含量测定的影响(略) 2.2.2石油醚提取次数考察样品用甲醇提取后,提取液用石油醚(30~60℃)萃取除杂,10m
3、l/次,考察不同提取次数对人参皂苷Rb1提取的影响。结果见表2。依据结果,为缩短样品处理时间,确定石油醚提取次数为2次。 2.2.580%乙醇洗脱用量及收集洗脱液量的考察考察不同80%乙醇洗脱用量及收集洗脱液量对人参皂苷Rb1提取的影响。结果见表5。依据结果,确定80%乙醇洗脱用量为80ml,收集洗脱液70ml。表5不同80%乙醇洗脱用量及收集洗脱液量的比较(略) 2.3供试品溶液的制备取三七花药材粉末(过3号筛)10g,精密称定0.2g,置索氏提取器中,加氯仿60ml,加热回流1h,弃去氯仿液,药析挥去氯仿,加甲醇55ml,加热回流4h,提取液挥干,加
4、水10ml溶解,加石油醚(30~60℃)提取2次,10ml/次,弃取醚液,水液通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm,长15cm),以水70ml洗脱,弃去水液,再用20%乙醇50ml洗脱,弃去20%乙醇洗脱液,继用80%乙醇80ml洗脱,收集洗脱液70ml,蒸干,残渣加甲醇溶解并定量转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。 2.4标准曲线的建立取人参皂苷Rb1对照品约11mg,精密称定,用甲醇定容至10ml容量瓶中,配制成浓度为1.16mg·ml-1的对照品溶液。用甲醇逐级稀释成一系列浓度的标准液。按上述色谱条件进样HPLC分析,以峰面积(A
5、)对含量(Y)进行线性回归,得标准曲线回归方程为Y=0.0046A+0.1129r=0.9999,线性范围为0.58~11.6μg。 2.5精密度实验取同一人参皂苷Rb1对照品溶液,连续进样6次,精密度为0.55%。 2.6稳定性实验取同一供试品溶液,于0,2,4,6,8h分别进样,精密度为0.83%。 2.7重复性实验取相同制法制备的同一批次5份样品进行测定,结果RSD为4.12%,表明重复性良好。 2.8回收率实验于三七花粉末中加入适量人参皂苷Rb1对照品标准液形成高、中、低3个浓度的样品,按“2.3”处理后进行HPLC分析,计算人参皂苷Rb1的
6、方法回收率,得回收率分别为102.88%,97.87%,103.57%。结果见表6。表6回收率实验结果(略) 2.9三七花药材含量测定取三七花药材粉末10g,精密称定0.2g,按上述测定方法进行HPLC测定。结果见表7。表7三七花药材含量测定结果(略) 3讨论 本文曾以三七块根研究中常用的人参皂苷Rg1作为测定指标建立含量测定方法,但在实验中发现三七花中Rg1含量远少于Rb1,以其作为测定指标有所不妥,与文献报道相符。 由于三七花中所含组分较多,包括黄酮类、挥发油类、多糖类、氨基酸类等,且含有块根所没有的大量叶绿素,极易对测定造成干扰,故在供试品制备
7、中选用D101型大孔吸附树脂,先用水洗去多糖,再用20%乙醇洗去黄酮类物质,最后收集80%乙醇洗脱液,结果表明可起到较好的纯化作用。 从研究结果看,云南文山的三七花总皂苷含量高于广西靖西,表明不同产地的药材有一定差异,选材时必须加以考虑。【参考文献】 [1]刘刚,鲍建材,郑友兰,等.三七化学成分研究进展[J].人参研究,2004,2:10. [2]田国才.三七花治疗心律失常的探讨[J].中国民族民间医药杂志,2000,44:147. [3]周迎春,赵怀清,梁宁,等.高效液相色谱法同时测定三七总皂苷中人参皂苷Rg1、Re、Rb1和三七皂苷R1含量[J]
8、.沈阳药科大学学报,2003,20(1):27.
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