反相高效液相色谱法测定三七花中人参皂苷rb1的含量

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1、反相高效液相色谱法测定三七花中人参皂苷Rb1的含量沈岚，冯怡，徐德生，苑素云，周端【摘要】　　目的为三七花质量标准研究打下基础。方法采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法对三七花中人参皂苷Rb1含量进行测定。结果人参皂苷Rb1含量在8h内基本稳定；精密度RSD为0.55%，重复性RSD为4.12%，高、中、低浓度组的回收率分别为102.88%，97.87%，103.57%。结论方法学考察结果符合质量分析的要求，可用于三七花中人参皂苷Rb1含量测定。【关键词】三七花人参皂苷Rb1反相高效液相色谱法　　Abstract：ObjectiveTogive

2、thefoundationofqualitystandardofNotoginsengbud.MethodsRP-HPLCineRb1ofNotoginsengbud.ResultsThestabilitytimeethodethodaccordsent.ItcanbeusedindeterminingthecontentofRb1inNotoginsengbud.　　KeyC18100A5μm250mm×4.6mm；试剂均为色谱纯。人参皂苷Rb1对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）。　　2方法与结果　　2.1色谱条件色谱柱Alltech

3、PlatinumC18100A5μm250mm×4.6mm；流动相为乙腈-水（30∶70）；检测波长为203nm。色谱图见图1～2。　　2.2供试品制备条件的考察　　2.2.1甲醇回流时间的考察考察了甲醇回流时间对人参皂苷Rb1提取的影响。结果见表1。依据结果，确定甲醇提取时间为4h。表1不同甲醇提取时间对含量测定的影响（略）　　2.2.2石油醚提取次数考察样品用甲醇提取后，提取液用石油醚（30～60℃）萃取除杂，10ml/次，考察不同提取次数对人参皂苷Rb1提取的影响。结果见表2。依据结果，为缩短样品处理时间，确定石油醚提取次数为2次。　　2.2

4、.3水淋洗用量的考察　　考察不同水淋洗用量对糖类成分淋洗程度的影响。结果见表3。依据结果，确定水淋洗用量为70ml。表2不同提取次数的比较（略）表3不同水用量的比较（略）　　2.2.420%乙醇淋洗用量的考察考察不同20%乙醇淋洗用量对人参皂苷Rb1提取的影响。结果见表4。依据结果，确定20%乙醇淋洗用量为50ml。表4不同20%乙醇用量的比较（略）　　2.2.580%乙醇洗脱用量及收集洗脱液量的考察考察不同80%乙醇洗脱用量及收集洗脱液量对人参皂苷Rb1提取的影响。结果见表5。依据结果，确定80%乙醇洗脱用量为80ml，收集洗脱液70ml。表5不

5、同80%乙醇洗脱用量及收集洗脱液量的比较（略）　　2.3供试品溶液的制备取三七花药材粉末（过3号筛）10g，精密称定0.2g，置索氏提取器中，加氯仿60ml，加热回流1h，弃去氯仿液，药析挥去氯仿，加甲醇55ml，加热回流4h，提取液挥干，加水10ml溶解，加石油醚（30～60℃）提取2次，10ml/次，弃取醚液，水液通过D101型大孔吸附树脂柱（内径1.5cm,长15cm），以水70ml洗脱，弃去水液，再用20%乙醇50ml洗脱，弃去20%乙醇洗脱液，继用80%乙醇80ml洗脱，收集洗脱液70ml，蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移至10ml量瓶中，

6、加甲醇至刻度，摇匀，即得。　　2.4标准曲线的建立取人参皂苷Rb1对照品约11mg，精密称定，用甲醇定容至10ml容量瓶中，配制成浓度为1.16mg·ml-1的对照品溶液。用甲醇逐级稀释成一系列浓度的标准液。按上述色谱条件进样HPLC分析，以峰面积（A）对含量（Y）进行线性回归，得标准曲线回归方程为Y=0.0046A+0.1129r=0.9999，线性范围为0.58～11.6μg。　　2.5精密度实验取同一人参皂苷Rb1对照品溶液，连续进样6次，精密度为0.55%。　　2.6稳定性实验取同一供试品溶液，于0，2，4，6，8h分别进样，精密度为0.8

7、3%。　　2.7重复性实验取相同制法制备的同一批次5份样品进行测定，结果RSD为4.12%，表明重复性良好。　　2.8回收率实验于三七花粉末中加入适量人参皂苷Rb1对照品标准液形成高、中、低3个浓度的样品，按“2.3”处理后进行HPLC分析，计算人参皂苷Rb1的方法回收率，得回收率分别为102.88%，97.87%，103.57%。结果见表6。表6回收率实验结果（略）　　2.9三七花药材含量测定取三七花药材粉末10g，精密称定0.2g，按上述测定方法进行HPLC测定。结果见表7。表7三七花药材含量测定结果（略）　　3讨论　　本文曾以三七块根研究中常

8、用的人参皂苷Rg1作为测定指标建立含量测定方法，但在实验中发现三七花中Rg1含量远少于Rb1，以其作为测定指标有所不妥，与