高效液相色谱法测定乌龙丹中人参皂苷rg1的含量论文

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1、高效液相色谱法测定乌龙丹中人参皂苷Rg1的含量论文【摘要】目的建立测定乌龙丹中人参皂苷Rg1含量的方法。方法应用高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1的含量。色谱条件：流动相为乙腈∶0.2%磷酸（83∶17），检测波长为203nm，流速1.0ml/min。结果人参皂苷Rg1在0.404～4.040μg范围之内呈良好的线性关系，r=0.9996。平均回收率96.34%，RSD=2.37%。结论此法简便、准确，重现性好，可用于测定乌龙丹中人参皂苷Rg1的含量。【关键词】乌龙丹人参皂苷Rg1高效液相色谱DeterminationofGinsenosideRg1inethodsGinsenosideRg1i

2、nedbyHPLC.ThemobilephaseoL/Lphosphoricacid(83∶17)ataflol/min,anddetection.ResultsThedeterminationmethodforginsenosideRg1hadagoodlinearrelationshipintherangeof0.404～4.04μg,r=0.9996.Theaveragerecoveryethodissimple,accurateandreliable,inationofthecontentsofginsenosideRg1inillennium32色谱工作站。2方法与结果2.1人参皂苷

3、Rg1对照品溶液的制备精密称定人参皂苷Rg15.05mg，用甲醇溶解定容至25ml量瓶中，即得。2.2样品溶液的制备精密吸取乌龙丹14g，置50ml具塞三角瓶中，精密加入70%乙醇至量，称重，立即超声30min，静置10min，补足原重量，滤过，精密吸取续滤液25ml，减压回收乙醇至干，残渣以水10ml溶解，水溶液置50ml分液漏斗中，水溶液过大孔树脂（15cm，φ1cm，干法装柱），以水100ml，30%甲醇100ml，甲醇100ml洗脱，收集甲醇液，并减压回收至干，再用甲醇定容至5ml量瓶中，即得样品溶液。2.3缺生晒参溶液的制备取缺生晒参样品，按样品溶液的制备方法制成缺生晒参阴性溶液。2

4、.4色谱条件色谱柱为KromailC18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm），流动相为乙腈：0.2%磷酸（83∶17），检测波长203nm，流速1.0ml/min，进样量10μl。在此色谱条件下，取人参皂苷Rg1对照品溶液、供试品溶液、缺生晒参阴性对照品溶液各10μl，进行HPLC测定，结果见图1～3。可见与对照品保留时间一致，并且人参皂苷Rg1与其他组分达到较好地分离。而阴性未出现该峰，不干扰此成分的测定。2.5人参皂苷Rg1标准曲线制备分别精密吸取人参皂苷Rg1对照品溶液(0.202mg/ml)2，4，8，10，15，20μl进样，按上述方法测定，以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标

5、，绘制工作曲线。回归方程为：Y=122262X+1330.2，r=0.9991，r=0.9996，线性范围为0.404～4.040μg。2.6精密度实验以同一对照品溶液连续重复进样5次，以人参皂苷Rg1峰面积的RSD=0.23%（n=5）。结果表明精密度良好。2.7重现性实验按前文所述“含量测定”方法，对同一批样品，分别制备5份供试品溶液，各吸取10μl，进行HPLC法测定，结果人参皂苷Rg1含量为0.1593mg/g，RSD＝1.57%。表明本法重现性良好。2.8稳定性实验取同一供试品溶液照含量测定方法，每隔2h进样测定，共5次，结果表明，供试品溶液在8h内基本稳定，RSD为0.27%（n=

6、5）。2.9回收率实验采用加样回收实验，精密称取已知含量的样品（人参皂苷Rg1含量为0.1593mg/g），精密加入一定量的对照品，分别为人参皂苷Rg1对照品溶液（0.202mg/ml）4，5.5，6.5ml按样品含量测定方法测定含量，计算加样回收率，平均加样回收率为96.34%，RSD为2.37%（n=9）。结果见表1。表1回收率实验结果（略）2.10样品的含量测定取对照品溶液和供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算，5批样品含量的测定结果见表2。表2人参皂苷Rg1的含量测定结果（略）根据上述测定结果，暂定供试品每g含人参皂苷Rg1不得少于0.15mg。3讨论实验中曾

7、用多种流动相对乌龙丹流浸膏组分的分离情况进行考察，结果以乙腈∶0.2%磷酸（83∶17）为流动相时，人参皂苷Rg1的峰型较好，分离效果好，杂质干扰少，故选用其为本法的流动相。乌龙丹流浸膏采用水提取法，比较切合临床实际，但可能影响了人参皂苷Rg1的提取率，因此，该制剂的提取工艺有赖临床使用情况最后确定。本实验采用HPLC法测定乌龙丹流浸膏中人参皂苷Rg1的含量，证明此方法简便、准确，重现性、回收率均