人参愈伤组织无性系培养条件优化及次生代谢调控研究

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1、分类号：R282；Q946密级：无吨雄露尊z孽硕士学位论文y-932551单位代码：10193学号：2003132人参愈伤组织无性系培养条件优化及次生代谢调控研究StudiesonoptimizationofcultureconditionandsecondmetabolismregulationofPanaxginseng研究生：王建坐指导教专业名研究方所在学师：韭羞蕴麴握称：佳趁遗佳直弛向：麴旦焦塑缉盥王捏院：生堑拉盔堂瞳2006年5月人参愈伤组织无性系培养条件优化及次生代谢调控研究摘要本实验研究以人参芽胞、实生苗的根、茎、叶

2、为外植体进行愈伤组织诱导试验。结果表明，各种不同外植体在相同诱导条件下均能诱导出愈伤组织，且诱导率相差不大。选取2．4一D、NAA、Bh、KT四种植物生长调节物质，采用单独使用和配合使用两种方法，分析比较了各因素在愈伤组织诱导中的作用大小及同一物质不同浓度间的差别，通过正交设计筛选出了诱导人参愈伤组织的最佳生长调节物质组合为懈+2．4一D4rag·L_‘+BA1．5mg·L～。优化了人参愈伤组织无性系的培养条件。在培养基方面，主要进行了培养基类型、碳源、氮源及植物生长调节物质对培养物影响的研究，筛选出以改良Ms培养基为基本培养基，

3、添加3％蔗糖、1650rag·L-】NH4N03、4mg·L～2．4-D、0．5mg也1BA的最佳培养基。在此基础上，进一步研究了培养基pH值、接种量、温度、光照对培养物生长、皂苷含量及皂苷产量的影响，确定了接种量为2～4克／瓶、pH值为6．0、温度为22℃、黑暗的培养条件，最有利于人参愈伤组织生长及皂苷合成。另外，确定了芽诱导的最佳培养基为黼+BAlmg·LfI十KT1．5mg·L_1。以水杨酸为诱导子，观察其对人参培养物次生代谢的影响。选择出了水杨酸最佳添加浓度为10一mg·L_1，最适添加时期为接种后的第28天，以这种方式处

4、理后的人参愈伤组织皂苷含量和皂苷产量分别比对照提高了3496和64％。同时，跟踪测量了水杨酸加入后一定时期内，细胞中多糖、过氧化物酶、苯丙氨酸解胺酶及多酚氧化酶的变化情况。结果表明，多糖在水杨酸加入48h后达到峰值1．67％，比对照高50．5％。过氧化物酶在水杨酸加入后一直上升较快，到24h时活力最强，随后减弱，但也高于对照。苯丙氨酸解胺酶在加入水杨酸后，活力出现了两次峰值，在48h时达到最高，比对照高6．1％；84h为第二峰值，比对照高18．9％。多酚氧化酶72h达到活力最高值。关键词：人参，愈伤组织，水杨酸，生理生化分析，皂苷

5、IIStudiesonoptimizationofcultureconditionandsecondmetabolismregulationofPanaxginsengAbstractnlisstudywasinitiatedtoinducecallsfromshoots，roots，stemsandleavesofPanaxginseng．Theresultsshoweddifferentexplantsc趾allbeinducedtoformcallusandtherewasnoobviouslydifferentinindu

6、cedrate．Effectsof2．4一D、BA、NAAandKToncallusinductionwereinvestigatedbyusingtheorthogonaldesign．Statisticanalysisindicated也eoptimalmediumforcallusinductionisMS+2．4·D4mg·L-1+BAl．5mg·L～．Selectionofcultureconditioaswasalsostudied．Effectsofthetypeofmedium。CarbonSOurCe、nitro

7、genSOUrceanddifferentgrowthregularsoncallusgrowth．Saponincontentandsaponinyieldwereinvestigated．Weconductedtheconcentrationofsourceis3％．theconcentrationofNH4N03is1650mg·L。andtheconcentrationof2．4-D、BAare4mg·L一、O．5mg·Lflrespectively,Inthiscondition,thecallushavehi曲grow

8、thrateandsaponincontentandsaponinyieldarealsoimprovedsignificantly．111einoculumquantity、valueofmedium、temperatureandlightwer