苜蓿花药愈伤组织继代和分化及再生培养条件的优化

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1、新疆农业大学硕士学位论文苜蓿花药愈伤组织继代和分化及再生培养条件的优化姓名：李增红申请学位级别：硕士专业：草业科学指导教师：张博20080501摘要本实验以苜蓿花药为材料诱导出愈伤组织，进行继代培养和诱导再生植株，旨在研究这一过程中继代与分化培养条件优化、继代与生根培养基的优化。实验还初步研究了流式细胞法对苜蓿染色体倍性的鉴定，为完善苜蓿DH系的构建提供科学依据。研究结果如下：①花药愈伤继代培养中MS和N6大量元素培养基交替使用，愈伤组织的增值和颜色要好于单一使用。②继代培养的第1-5代生长素添加量为2mg／1，增值培养阶

2、段为0"---0．5mg／1，继代培养第6—10为1．5-2．5mg／1，添加防褐物质AC0．89／1，为花药愈伤继代培养较优的生长素组合方式。③LH用量为0．8一lg／1不仅能增加愈伤组织的生物量，且具有防褐化的作用。④分化培养中愈伤组织长出松散的绿点时，要及时将细胞分裂素浓度降到2．Omg／1以下，否则，愈伤较易褐化或形成畸形苗。⑤激素、大量元素等因素正交实验的结果表明，2，4一D和大量元素对愈伤组织体积增加的差异显著(F>3．096，P<0．05)，光照强弱对2，4一D和大量元素添加影响不大。6一BA、LH和AC在不

3、同的光照下愈伤组织体积增加变化差异明显。⑥再生植株的生根培养基为1／2MS+O．01—0．05mg／1NAA+Ig／1LH+蔗糖209／1+琼脂6．59／1较好，基部无愈伤且根粗壮的植株较适合移栽。⑦流式细胞仪对愈伤组织、再生幼苗的染色体倍性分析结果表明，愈伤组织倍性与继代培养次数没有明显相关性。关键词：苜蓿，花药培养，愈伤组织，再生，流式细胞法ABSTRACTTheexperimentalmaterialsisalfalfaanther,inducedcallus，andstudyoptimizationofcultur

4、econditionsforsubcultureanddifferentiationandregeneration．Theexperimentsalsostudiedpreliminaryploidyidentificationtheofalfalfachromosomesbyflowcytometrymethod．ItprovideascientificbasistoimprovetheconstructionofalfalfaDH．Theresultsareasfollows：①．ThealternationofMsa

5、ndN6wasmoreeffectivemediumthanusingsinglemacroelementinsubculture，anditisthebetterincrementandcolourofcaUus．②neadditionamountofauxinis2mg／linthe1-5thgenerationsubculture．Itisgenerally0"-0．5menintheincrementculturestage．Itis1．5-2．5mg／lsubcultureinlast．Itistheoptimu

6、mcombinationofauxintoaddtoAC(0．89n1forpreventingbrowningin6—10thgenerationsubculture．⑨LHisnotonlyincreasebiomassofcallusbutalsopreventbrowningtoaddto0．8．19／1．．④Cytokininwillreduceconcentrationintimewhencaiusgrowedloosegreendotinthedifferentiationculture，anditshoul

7、dbelessthan2．0mg／l，OtherwisecaUuseasytobrowningormalformedseedling．⑤neresultsshowthattheorthogonalofmacroelementandhormone，Thedifferenceofincreasedvolumewasgenerallysignificant(F>3．096，P<0．05)to2。4-1)andmacroelementincallusgrowth．Weaklyandstronglighthaslittleeffec

8、t．Thedifferenceof6-BA,LHandACchangesignificantlytodifferentlight．Requirementofcalluswasdifferentobviouslytocomponentsofmediumunderdifferentlightconditio