苜蓿花药愈伤组织继代和分化与再生培养条件的优化

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1、蓖稽花药愈伤组织继代和分化及再生培养条件的优化染色体在分裂时，具有共同的纺锤丝，这样使一组生殖核的染色单体和一组营养核的染色单体，共同融合在一个子核中。其余两组染色体，融合到相对的一个子核中去。结果形成两个相似的二倍体核，从这种具有二倍体核的再生植株则是二倍体花粉植株。C2，生殖核先行核内复制，然后有丝分裂一次，有一组染色单体变为四组染色单体。营养核分裂一次保持两组染色。同时进入有丝分裂并以上述同样的方法融合，则产生两个相似的三倍体核，这种花粉可能发育成三倍体的花粉植株。C3，营养核和生殖核均先进行核内复制一次，接着有丝分裂一次，然后同时进入有丝分裂发生核融合产生四倍体

2、核。这种具有四套染色体组的花粉粒进一步发育，可能形成四倍体花粉植株。1．4单倍体培养的意义单倍体在植物遗传进化和作物育种研究中具有重要的理论价值和应用价值：利用单倍体产生的双单倍体植株构建DH纯系，由于DH纯系或纯合二倍体在遗传上是高度纯合的，因此其在以下五个方面的的应用前景。1．4．1直接应用于育种实践，培育新品种加倍单倍体育种技术较常规育种法可以明显加速育种进程，缩短育种年限。系谱法通过亲本选配，人工杂交获得Fl，再繁殖到F2，经过5至6代的自交提纯复壮，才可以获得性状表现一致的品系，等到新品种推广，一般需8年左右，育种年限长。而加倍单倍体的纯合只需要一个世代，比常

3、规育种获得纯系节省3至4个世代，且DH群体内，所有的基因都已经纯合固定，目标基因不会随世代的提高而发生分离丢失，从而提高育种的选择效率。运用结合原位杂交技术(insituhybridization)的分子标记等现代生物技术，辅助选择，从DH系后代中迅速筛选出目的基因纯合的植株，提高选择效率，加速育种进程19]。1．4．2作为转基因受体获得转基因植株的主要方法是农杆菌介导法。1985年，Horsch用土壤农杆菌感染烟草叶片外植体，首创叶盘法转移外源基因，开创了以植物外植体进行转基因的新途径。自1973年，烟草基因工程已取得明显进展【lo

4、¨1。通过将病毒外壳的蛋白基因、复

5、制酶亚基因等导入到烟草的基因组并得到表达时，使转化烟草植株获得了对该病毒的抗性‘121。Beaujean掣131观察结果，GUS基因在烟草DH群体的表达大约是同一亲本单倍体的219倍，DH植株转基因的表达，表现出明显的剂量效应，因4薪疆农业大学硕士学位论文此用DH植株作转基因受体更有优势。1．4．3抗病突变体基因工程烟草抗性基因多数表现为隐性遗传。DH群体内被发现和选择出隐性抗病系或者有益突变体。对突变体所包含的抗病基因运用基因工程方法进行加工，就可以获得多抗型的品种。1980年，周嘉平等在花药培养中以病原类毒素作为抗性选择压力，从烟草感病品种中筛选出抗黑胫病抗性突变体

6、(转引自佟道儒，1997)[101。1．4．4构建基因图谱构建遗传连锁图常用的基本材料有F2群体、回交群体、加倍单倍体群体、重组自交系群体等。F2群体所含基因型种类多，信息量大，作图效率高，但F2是分离群体，而DH群体所含信息量相对较小，每个个体都是遗传上纯合的株系，这类群体有利于连续性研究，可以在很大程度上提高基因定位和标图的准确性。DH群体作为作图群体，除有利于同一实验室进行连续多年的积累性研究外，还可供不同实验室开展合作的平行性研究，而且用同一群体汇总的遗传学数据均可累加。所以，被认为是扩增片段长度多态性(AFLP)、限制性片段长度多态性(RFLP)，随机扩增多态

7、性(RAPD)等分子标记和基因图谱研究的极好材料【11】。1．4．5数量性状基因定位植物重要的农艺性状都是数量性状，它们既受基因的控制，又受环境等因素的影响。传统的数量性状遗传分析不能有效的检验出某单个遗传位点、染色体上的位置及其它基因的连锁关系，而高密度饱和分子标记连锁图的建立就使其成为可能。DH群体因其所含信息量大且无遗传变异，被认为是数量性状基因位点分析的良好群体【11】。近年来，育种家采用DH群体进行遗传分析也非常有效。Choo和Reinbergstl41提出了DH群体进行遗传分析的理论方法。胡中立等‘151研究了利用DH群体或RIL群体鉴定数量性状主基因的存在

8、及其遗传参数估计，发现较常规遗传分析群体，更能反映基因间的相互作用，提高遗传分析的准确性。章元明等【16J利用DH群体建立了检测数量性状位点(QTL)体系并提出了估计其遗传效应的理论方法，其研究结果为提高数量性状位点作图的准确性提供了可靠的理论依据。Luo和Kearseyll71用最大似然法估测回交群体和DH群体标记基因和数量性状位点的联系取得了较好的效果。5营稽花药愈伤组织继代积分化及再生培养条{牛的优化2植物花药培养的研究概况植物花粉的研究工作始于1953年，TuLeck培养银杏的成熟花粉粒能够长出愈伤组织，并观察了花粉粒在培养基上的