杜仲愈伤组织继代培养条件的优化

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1、河南农业科学，２０１４，４３（５）：１３８－１４１ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ杜仲愈伤组织继代培养条件的优化金晓玲１，王征１，伍江波１，刘雪梅１，杜红岩２（１．中南林业科技大学风景园林学院，湖南长沙４１０００４；２．国家林业局泡桐研究开发中心，河南郑州４５０００２）摘要：为了建立杜仲愈伤组织再生体系，为转基因研究提供平台，以成熟胚诱导的浅黄色愈伤组织和幼胚诱导的乳白色愈伤组织为材料，研究不同培养基、继代时间、继代次数对杜仲愈伤组织生长和不定芽诱导的影响。结果表明：浅黄色愈伤组织继代培养后具有不定芽的分化能力

2、，乳白色愈伤组织继代培养后褐化死亡；愈伤组织继代培养基为ＭＳ＋６－ＢＡ１．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０５ｍｇ／Ｌ，继代周期为１８ｄ；愈伤组织继代次数对愈伤组织增殖有显著影响，以继代４次的增殖倍数最高，达２．５；愈伤组织继代次数对不定芽的诱导有显著影响，以继代２次的愈伤组织不定芽诱导率最高，达到６６．７％，继代４次的愈伤组织不定芽的增殖系数最高，为３．２。关键词：杜仲；愈伤组织；继代周期；增殖中图分类号：Ｓ５６７．１文献标志码：Ａ文章编号：１００４－３２６８（２０１４）０５－０１３８－０４ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＳｕｂｃｕｌｔｕｒｅＣｏｎｄｉｔｉｏ

3、ｎｓｏｆＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓＣａｌｌｕｓ１，ＷＡＮＧＺｈｅｎｇ１，ＷＵＪｉａｎｇ－ｂｏ１，ＬＩＵＸｕｅ－ｍｅｉ１，ＤＵＨｏｎｇ－ｙａｎ２ＪＩＮＸｉａｏ－ｌｉｎｇ（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬａｎｄｓｃａｐｅＡｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒｅ，ＣｅｎｔｒａｌＳｏｕｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０００４，Ｃｈｉｎａ；２．ＰａｕｌｏｗｎｉａＲｅｓｅａｒｃｈａｎｄＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＣｅｎｔｅｒ，ＳｔａｔｅＦｏｒｅｓｔｒｙＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００２，Ｃｈｉｎａ

4、）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｏｆＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓｃａｌｌｕｓ，ｔｈｅｂｕｆｆｃａｌｌｕｓｆｒｏｍｍａｔｕｒｅｅｍｂｒｙｏｓａｎｄｃｒｅａｍｗｈｉｔｅｃａｌｌｕｓｆｒｏｍｙｏｕｎｇｅｍｂｒｙｏｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｍｅｄｉｕｍ，ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｔｉｍｅ，ａｎｄｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｔｉｍｅｓｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆｃａｌｌｕｓａｎｄｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｂｕｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｂｕｆｆｃａｌｌｕｓｈ

5、ａｄｔｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎａｆｔｅｒｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ，ｔｈｅｃｒｅａｍｗｈｉｔｅｃａｌｌｕｓｆｒｏｍｙｏｕｎｇｅｍｂｒｙｏｓｄｉｅｄａｆｔｅｒｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ．ＴｈｅｓｕｉｔａｂｌｅｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｆｏｒｃａｌｌｕｓｗａｓＭＳ＋６－ＢＡ１．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０５ｍｇ／Ｌａｎｄｓｕｉｔａｂｌｅｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｐｅｒｉｏｄｗａｓ１８ｄａｙｓ．Ｔｈｅｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｃａｌｌｕｓｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｔｉｍｅｓ，ｔｈｅｍ

6、ｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎｔｉｍｅｓｗａｓｈｉｇｈｅｓｔｗｉｔｈ２．５ａｆｔｅｒｔｈｅｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｆｏｒｆｏｕｒｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｂｕｄｗａｓａｌｓｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｔｉｍｅｓ，ｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｒａｔｅｏｆａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓｂｕｄｗａｓｈｉｇｈｅｓｔｗｉｔｈ６６．７％ａｆｔｅｒｔｈｅｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｆｏｒｔｗｏｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓ，ａｎｄｔｈｅｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔｗａｓｈｉｇｈｅｓｔ

7、ｗｉｔｈ３．２ａｆｔｅｒｔｈｅｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｆｏｒｆｏｕｒｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｅｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓ；ｃａｌｌｕｓ；ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅｐｅｒｉｏｄ；ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ杜仲（ＥｕｃｏｍｍｉａｕｌｍｏｉｄｅｓＯｌｉｖｅｒ）为杜仲科杜关键合成酶的发现，使利用转基因技术获得有效成［１］［２］［１０］仲属的第三纪孑遗植物，为国家二级保护植物。分含量高的杜仲新品种成为可能。然而，稳定的近年来，随着杜仲药用价值和杜仲胶功能等研究的杜仲愈伤组织再生体系是成功进行杜仲转基因技术［３－６］深入，在全国范围内掀起了杜仲

8、研究的热潮。利研究的基础和前提。本研究对杜仲愈伤组织继代培用组织培养技术进行杜仲新品种的繁殖研究正在展养条件进行筛选，旨在为杜仲转基因分