胡萝卜肉质根愈伤组织的诱导及继代增值培养实验报告

胡萝卜肉质根愈伤组织的诱导及继代增值培养实验报告

ID:44118865

大小:104.08 KB

页数:8页

时间:2019-10-18

胡萝卜肉质根愈伤组织的诱导及继代增值培养实验报告_第1页
胡萝卜肉质根愈伤组织的诱导及继代增值培养实验报告_第2页
胡萝卜肉质根愈伤组织的诱导及继代增值培养实验报告_第3页
胡萝卜肉质根愈伤组织的诱导及继代增值培养实验报告_第4页
胡萝卜肉质根愈伤组织的诱导及继代增值培养实验报告_第5页
资源描述:

《胡萝卜肉质根愈伤组织的诱导及继代增值培养实验报告》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在工程资料-天天文库

1、综合性实验报告胡萝卜肉质根愈伤组织诱导及继代增殖培养一、实验原理及目的(一)实验目的1、通过MS培养基母液的配制和保存,掌握配制于保存培养基母液的基本技能。2、通过MS固体培养基的配制,掌握培养基的制备基木技能。3、学会和掌握诱导愈伤组织的基木技术。4、初步常握组织培养的无菌操作技术。5、初步掌握外植体的消毒技术。6、掌握组培室常用的化学试剂。7、学会和掌握愈伤组织继代培养的基木操作技术。(-)实验原理1、配制培养基时,为了使用方便和用量准确,通常釆用母液法进行配制,即将所选培养基配方屮各试剂的用量,扩大若干倍后再准确称量,分别先配制成一系列母液置于冰箱中保存,使用时按比例吸取母液进

2、行稀释配制即可。2、在自然情况下,根主要为植物吸收和固定的重要器官,同时,有些植物的根亦具冇繁殖的功能。植物根生长快、代谢能力强、变异小,使得英在研究根的营养吸收、生长和代谢的变化规律、器官分化、形态建成规律等方面具有重大的理论与实践意义。依据细胞全能性原理,即指任何具有完整细胞核的细胞(动物、植物等),都拥有形成一个完整个体所必需的全部遗传信息(DNA)。就胡萝卜根来说,其肉质根细胞同样具冇形成完整再生植株的能力。这种由单个根衍生而来并经继代培养而保存的,在遗传上具有一致的根的培养物,称为离体根无性系。利用这些离体根的无性系可以进行器官再生体系、苗木无性系快速繁殖和其他方面的实验研

3、究。3、愈伤组织(callus)原指植物体的局部受到创伤刺激后,在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成,可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。在植物体的创伤部分,愈伤组织可帮助伤口愈合;在嫁接中,可促使砧木于接穗愈合,并rfl新生的维管组织使砧木与接穗沟通。在植物器官、组织、细胞离体培养时,条件适宜也可以长岀愈伤组织。其发生过程是:外植体的活细胞经诱导,恢复其潜在的全能性,转变为分生细胞,继而其衍生的细胞分化为薄壁细胞组织而形成愈伤组织。愈伤组织诱导的成败关键主要不是外植体的來源种类,而是培养条件,其中激索的种类和浓度最为重耍。诱导愈伤组织常用的生长素是2,4-D,和NAA,

4、常用的细胞分裂素是KT和6-BAo愈伤组织形成的过程分为3个时期:诱导期、分裂期和分化期(形成期),愈伤组织的生长是发生在不与琼脂培养基接触的表面。4、调节培养基的酸碱性至PH=5.8左右。由于培养基的PH值直接影响到培养物对离子的吸收,因而过酸或过碱都会对植物材料的生长有很人的影响。此外,PII还影响到琼脂培养基的凝固情况。所以,当培养基配制好后应立即进行PII的调整。培养基若偏酸时用氢氧化钠(lmol/L)来调节,若过碱就用盐酸(lmol/L)来调节。当PH值高于6.0时,培养基将会变硬;当PH值低于5.0时,琼脂不能很好地凝固。5、植物组织培养的优点:①研究材料來源单一,无性系

5、遗传背景一致;②经济、方便、效率高;③条件可控、误差小;④生氏快、周期短、重复性强;⑤可全年试验或生长。6、继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后,营养枯竭,水分散失,并已经积累了一些代谢产物,此时需耍将这些组织转移到新的培养基上,这种转移称为继代培养。实际上就是对来自于外植体所增殖的培养物(包括细胞、组织或其切段)通过更换新鲜培养基及不断切割或分立,进行连续多代的培养。将诱导产生的芽、苗、愈伤组织、原球茎或胚状体等培养物重新分割,接种到新鲜培养基上进一步扩大培养的过程称为继代培养,也称为增殖培养。该过程是植物组织培养中决定繁殖速度快慢、繁殖系数高低的关键阶段。继代使用的培养基

6、对于一种植物来说,每次几乎完全相同。由于培养物在适宜的环境条件、充足的营养供应和生长调节剂作用下,排除了其他生物的竞争,繁殖速度大大加快。二.实验所需仪器设备及其原理(-)冰箱用于长期贮存培养基母液、生化试剂及低温处理材料。(-)培养箱用于少量植物材料的培养。有条件的话,述可采用全自动的调温、调湿人工气候箱来进行植物组织培养和试管苗快繁。(三)超净工作台超净工作台是为植物组织培养提供无菌操作环境,是最常用、最普及的无菌操作装置,和无菌室相比,超净工作台既方便又舒适,无菌效果又好。超净工作台一般由鼓风机、过滤器、操作台、紫外灯和照明灯等部分组成。它是将空气过滤后形成无菌的风,创造出一个

7、无菌环境。根据风幕形成的方式,超净工作台可分为水平式和垂直式两种。在一般的植物组织培养屮,两种都可以采用,而进行植物的遗传转化操作和农杆菌、人肠杆菌的接种时,最好采用垂直风幕式的超净工作台,这样可以避免细菌在空气中的扩散。(四)高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅主要用于培养基、蒸憾水和各种器械的灭菌消毒。高压灭菌锅冇大型、中型和小型三种。实验室最常用的是中型立式全自动灭菌锅和小型便携式美景,大型卧底式高压灭菌锅在大型工厂化植物组织培养上使用。(五)天平较常用的为

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。