杜仲组织培养及愈伤组织植株再生体系的建立

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1、TissueCultureofEucommiaulmoidesOliv．andtheEstablishmentofPlantRegenermionSystemthroughCallusbyWANGZhengAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofAgriculture1nLandscapeplantsandHorticulture1nCen仃alSouthUniversityofForestryandT

2、echnology498ShaoshanSouthRoad，TianxinDistrictChangshaHunan410004，P．R．CHINASupervisorProfessorJINXiaolingMay,2013学位论文原创性声明嬲剿嬲必本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品，也不包含为获得中南林业科技大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人

3、和集体，均已在文中以明确方式表明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：王／砬如／弓年舌月g日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件或电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权中南林业科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于：1、保密口，在年解密后适用本授权书。2、不保密囱。(请您在以上相应方框打“4’’)作者签名：王经Ⅻ

4、房年彭月踟导师签名：7◇f杜仲组织培养及愈伤组织植株再生体系的建立摘要杜仲(EucommiaulmoidesOliv．)是我国特有的经济和药用植物，是国家二级保护植物。实验在唐亮的研究《杜仲优良无性系快速微繁殖技术研究》的基础上，优化了杜仲组织培养体系，着重建立了以愈伤组织诱导、愈伤组织诱导丛生芽、壮苗生根路线为基础的植株再生体系，为杜仲转基因分子研究提供材料和技术平台，同时获得了大量杜仲优良品种的苗木。实验采用杜仲优良品种华仲5号为材料，以成熟胚、幼嫩胚、叶片、子叶和茎段(带芽或不带芽)为外植体进行了芽和愈伤组

5、织的诱导、增殖培养、伤组织诱导丛生芽的形成、不定芽的增殖和芽的生根培养等研究，筛选了各个阶段的适宜培养基，建立了杜仲组织培养技术体系。取得以下主要结果：1．成熟胚、幼嫩胚、叶片、子叶和不带芽茎段等外植体都能够直接诱导产生愈伤组织，但它们适宜的培养基配方不同。成熟胚：MS+BA2．0mg／L+NAA2．5mg／L，诱导率70％；幼嫩胚：MS+BA0。5mg／L+2，4一D2．0mg／L，诱导率88．9％；叶片：MS+BAl．0mg／L+NAAl．0mg／L，诱导率66．7％；茎段：MS+BA2．0mg／L+NAA0

6、．5mg／L，诱导率100％；子叶：MS+BA0．5．1．0mg／L+NAA2．5mg／L，诱导率88．9％。2．愈伤组织继代培养的适宜培养基配方为：MS+BA1．5mg／L+NAA0．05mg／L增殖系数250％和MS+NAAl．0mg／L+TDZ0．5mg／L，增殖系数200％；适宜的愈伤组织继代周期为20天。3．愈伤组织在MS+BA1．0mg／L+NAA0．05mg／L的培养基上，能够诱导产生丛生芽，诱导率88．9％，增殖系数3土1．19，并且继代2次的愈伤组织诱导丛生芽的效果最好。4．成熟胚和带芽茎段可以

7、直接诱导产生不定芽，成熟胚的适宜培养基为MS+BA0．5mg／L+NAA0．1mg／L，诱导率80％；带芽茎段为：MS+BA2．0mg／L+NAA0．5mg／L诱导率88．9％。4—6月间采集的枝条萌芽率最高达88．9％，且染菌率很低。5．芽增殖适宜的培养基配方是MS+BA3．0mg／L+NAA0．2mg／L，增殖率33．3％；芽继代培养的次数不同，对于其本身丛生芽的增殖和腋芽中南林业科技大学硕士论文的萌芽情况有影响；经过了3次继代培养的芽，长度在3．4cm左右，适合进行生根培养；使用无菌苗顶芽对于丛生芽的增殖和

8、腋芽的萌芽均较为有利。6．生根培养、炼苗和移栽：生根培养中，无论激素是否参与都能够正常诱导出根，其中以添加了IBA0．2mg／L的无机盐离子强度较低的1／4MS培养基效果最好，生根率达到80％，且根从基部长出，数量多，有利于移栽。移栽基质为等量的泥炭土和珍珠岩混合，成活率66．7％。关键词：杜仲(EucommiaulmoidesOliv．)；组织培养；愈伤组织；继代周期；