土人参愈伤组织诱导及细胞悬浮培养研究

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1、万方数据安徽农业科学，JournalofAnhuiA珈．Sci．2010，38(18)：9435—9437责任编辑马树梅责任校对卢瑶土人参愈伤组织诱导及细胞悬浮培养研究赵俊，吴虹丽，马林+(西南科技大学生命科学与工程学院，四川绵阳621010)摘要[目的]建立土人参愈伤组织的诱导、增殖继代培养及其细胞悬浮培养的技术体系。[方法]研究不同植物激素组合对叶片、茎段愈伤组织诱导的影响；采用液体振荡培养法测定叶片愈伤组织细胞悬浮生长曲线。[结果]叶片最易诱导产生愈伤组织，最佳诱导、增殖培养基为MS4-2，4一D1．0ms／L+NAA

2、0．5mg／L+6．BA0．5ms／L(pH5．8)。由叶片愈伤组织建立的细胞系生长呈“S”型曲线，最适继代周期为15d。[结论]以叶片为外植体经愈伤诱导、增殖培养可建立良好的细胞悬浮系。关键词土人参；愈伤组织；组织培养；细胞悬浮培养中图分类号Q813．1+l文献标识码A文章编号0517—6611(20lo)18—09435—03ResearchonCallusInductionandCeUSuspensionCultureofLpaniculatttmZHAOJuaetal(CollegeofLifescienceandE

3、ngineering，SouthwestUniversityofScienceandTechnology，Mianyang，Sichuan621010)AbstractfObjeetive]Theaimwastoestablishthetechnicalsystemsofcallusinduction，multiplicationsubcultureandthecellsuspensioncultureofZpaniculatum．fMethod]Effectsofdifferentplantgrowthregulators

4、oncallusinductionfromleafandstemsegmentwerestudiedThecellsuspensioncultureWaSestablishedfromleafcallusesandthegrowthcalvewastestedbyhquidshakeculturemethed．1ResultLeafwastheoptimalexplantforcallusinduction．TheoptimalmediamofmultiplicationSUbcultureforleafcalluseswa

5、s2．4．D1．0mg／L+NAA0．5mg／L+6-BA0．5mg／L(pH5．8)．necellgrowthofZpaniculatumwith⋯S’typeCUlⅣewasobservedandoptimalsubculturecycleofsuspensioncellWas15days．[Conclusion]111ecallusinducedfromleafexplantwasexcellentforestablishingcellsuspensionofzpanicula-turn．KeywordsZpan／cu

6、／atum；Callus：Tissueculture：Ceususpemionculture土人参[Talinumpaniculatum(Jaeq)Gaertn]为马齿苋科土人参属植物，我国南方各地均有栽培或野生。以根入药，具有健脾润肺、止咳、调经等功效¨1。土人参水提取物可诱导PCI2细胞的分化，冉靓等拉1分离纯化得到活性多糖；沈笑嫒等¨1从根中分离出胡萝卜苷、齐墩果酸、p．谷甾醇等活性成分。土人参的组织培养已有原生质体培养再生植株H1、单细胞培养再生植株"1、快速繁殖m一叫等报道，但对以种子为起始材料，进而建立细胞悬浮培

7、养系尚未见报道。笔者以土人参种子材料。无菌萌发后进行愈伤组织诱导、继代增殖培养及细胞悬浮培养，为研究土人参细胞悬浮培养次生代谢产物奠定了基础。1材料与方法1．1材料野生土人参采自四川省甘孜州康定县，由绵阳师范学院罗明华教授鉴定为Zpaniculatum。材料移栽于花盆并按常规进行水肥管理。采集成熟种子作为外植体接种。1．2方法1．2．1愈伤组织的诱导。将土人参种子装于10商无菌离心管中，用70％乙醇浸泡1rain，无菌水冲洗2次后加入0．1％Hgcl：处理10min，无菌水冲洗5—6次，无菌接种至MS基本培养基中。待土人参苗

8、培养1个月后，进行愈伤组织诱导试验，将实生苗的叶片剪成0．5cm见方的小块，茎段剪成O．5～0．8cm的小段接种至相应单因素及组合试验培养基中，观察愈伤组织诱导及生长情况。·1．2．2细胞悬浮系的建立。选取继代培养后质地松散、生长良好的愈伤组织约10g，转接于MS液体培养基中，500ml三