瓦松愈伤组织诱导研究论文

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1、瓦松愈伤组织诱导研究论文【摘要】目的探讨影响瓦松愈伤组织诱导因素，建立瓦松愈伤组织培养方法。方法采用组织培养方法，比较不同外植体、pH、温度、植物生长物质种类及其配比对瓦松愈伤组织诱导的影响。结果在培养基MS上，叶片的诱导率高达80%以上，茎和根难以诱导愈伤组织，诱导率近10%;不同pH差异不明显;愈伤组织诱导适宜温度为25℃;6-BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1诱导率最高。结论瓦松愈伤组织的培养的外植体为叶，适宜培养基为MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1(pH5.8)，培养温度为25℃.freelbriatu

2、s(Turcz.)Berger或晚红瓦松O.erudescens(Maxim.)Ohbriatus(Turcz.)Berger的全草。不同外植体比较研究取叶片、茎和根为试验材料;不同pH值、温度、不同种类和浓度的植物生长物质等比较研究取叶片作为试验材料。1.2仪器与试剂MGC-250型光照培养箱(上海一恒科技有限公司);YXQGCZ型电热式蒸汽消毒器(山东新华医疗器械厂);ESCO超净工作台(新加坡ESCO公司);PP-15EPH计(德国赛多利斯集团);萘乙酸(NAA)和6-苄基嘌呤(6-BA)，均为生化制剂;蒸馏水为超纯水(自制);其它实验所需的试

3、剂均为分析纯。2方法2.1材料处理新鲜瓦松植株用自来水冲洗干净，用75%的乙醇浸泡10min，用无菌水冲洗后,再放入0.1%HgCl2溶液中浸泡2～3min，用无菌水反复冲洗后，在无菌条件下，用无菌手术刀于滤纸上将植株按叶片、茎和根三部分分别切成0.5cm左右长的小段，接种到MS诱导培养基上，每个实验培养5瓶，每瓶接种5个。2.2培养基与培养条件培养基：以MS为基础的固体培养基，附加不同浓度的6-BA，NAA组成各种培养基，pH值均调至5.8，加入蔗糖30g·L-1，琼脂5g·L-1，121℃高压灭菌15min。培养条件：不同外植体(设叶片，茎，根)

4、、pH(设5.2,5.5，5.8，6.1，6.4)、温度(设15℃，20℃，25℃，30℃)，光照12h·d-1，光照度1200Lx。比较实验均采用MS+6-BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培养基;不同种类和水平植物生长物质及其配比对愈伤组织诱导影响实验选用2因素3水平正交设计L9(34)。所有实验培养温度均为25.0℃±0.5℃(温度试验除外)，外植体为叶片(外植体试验除外)，3～5d后持续观察愈伤组织诱导结果。2.3成愈率的计算成愈率(%)=(产生愈伤组织的块数/接种的块数)×100%3结果3.1不同外植体对愈伤组织诱导的影响第6

5、天在叶片外植体的切口处观察到愈伤组织的生长，诱导率高达80%以上;用茎或根作为外植体难以诱导出愈伤组织，诱导率很低，只有10%左右。因此确定叶片为瓦松诱导愈伤的最佳外植体。3.2不同pH对愈伤组织诱导的影响从表1可知，偏低的pH对愈伤组织生长较为有利，出愈率高，但从愈伤组织生长质量方面看，不同pH差异不明显，诱导的愈伤组织均呈绿色，质量好。表1不同pH对愈伤组织诱导的影响3.3不同温度对愈伤组织诱导的影响不同温度对愈伤组织诱导的影响结果见表2。从表2可以看出，25℃愈伤组织诱导率最高，为92%，而且质量较好，诱导的愈伤组织呈现绿色;15℃最低，成愈率

6、仅为52%，生长缓慢。因此选取培养的温度为25℃。表2不同温度对愈伤组织诱导的影响3.4不同植物生长物质种类及其配比对愈伤组织诱导的影响结果见表3。结果表明2种激素对愈伤组织诱导作用中，6-BA的作用较比NAA的作用强，6-BA2个浓度中，1.0mg·L-1作用比0.5mg·L-1强，而NAA的2个浓度的作用较为接近，6-BA1.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1较适合愈伤组织的诱导。4讨论药用植物愈伤组织诱导受很多因素的影响，其作用程度和大小因植物种类不同而不同。影响景天科植物愈伤组织诱导的主要因素有外植体、植物生长物质种类及其配比等、pH、

7、温度、光照等2～4。本实验表明，外植体和植物生长物质是影响瓦松愈伤组织诱导较为关键的因素。外植体中，叶片诱导率较高，达80%以上，而茎和根难以诱导愈伤组织诱导，这与文献报道5，6景天科属植物大花红景天愈伤组织诱导选用的外植体为叶或叶柄，而根和茎难诱导率低下的实验结果一致，这可能与瓦松叶片肉质肥厚多汁，营养储备多，而茎和根较细(0.5mm)，营养储备少，伤面又较小等有关。植物生长物质种类及其配比试验中，6-BA对瓦松愈伤组织诱导效果好，说明在瓦松愈伤组织诱导及继代培养中宜使用6-BA。通过4因素3水平正交实验证明，在培养基MS+6-BA1.0mg·L-

8、1+NAA0.1mg·L-1上，瓦松愈伤组织诱导效果最好。文献报道。温度和pH对瓦松愈伤组织诱导也有一定的影