冬葵愈伤组织诱导技术研究.pdf

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1、内蒙古农业科技2012(6)：24～25InnerMongoliaA酣culturalScienceAndTechnology冬葵愈伤组织诱导技术研究黄凤兰1，赵永1，布和巴特2，李海峰1，卜志刚1，李跃-，曾健寒·，邹千稳1，(1．内蒙古民族大学生命科学学院内蒙古通辽028000；2．内蒙古民族大学蒙医药学院内蒙古通辽陈玲玲1028000)摘要：冬葵(MalvaverticillataL．)是一种具有很高药用价值的蒙药，实验以冬葵叶片和茎段为外植体诱导愈伤组织，为冬葵的快繁和细胞培养奠定基础。实验结果如下：冬葵叶片和茎段最适消毒条件是0．1％升汞分别

2、消毒50s、2．5rain：叶片和茎段诱导愈伤组织阶段最适培养基相同，均为MS+蔗糖(309，L)+琼脂(79，L)+NAA(0．4mg／L)+6一BA(3mg，L)+抗坏血酸(600mg，L)。关键词：冬葵：愈伤组织；tit物生长调节剂中Itt分类号'：S567文献标识码：A10．3969，j,jssn．1007—0907．2012．06．013文章编号：1007—0907(2012)06～0024—02StudyOiltheCallusInductionTechnologyofMalvaverticillataL．HUANGFeng-lan(CoU

3、egeofLifeScience，InnerMongoliaUniversityforNationalities，Tongliao028000，China)Abstract：MalvaverticillataL．isavaluablemedicinalplantinMongolianpharmacy．Inthispaper，wecarriedoutcallusinductionexperimentswithleavesandstemsectionsfromthisplantasexplants，andlaidasolidfoundationforfut

4、urerapidpropagationandcellculture．Theoptimizedexperimentprotocolswereasfollows．TheleavesandstemsweresterilizedinHgCl2for50Sor2．5min，andthenplacedonthedevelopedmediumcontainingMS，309／Lsucrose，7s／LAgar,0．4mg／LNAA，3mg／L6-BAand200m∥LvitaminC．Keywords：MalvaverticillataL．；Callus；Plant

5、growthregulator冬葵(MdvaverticillataL．)，别名冬览菜、冬寒菜、野葵、滑菜．为锦葵科一年或二年生草本植物。嫩茎叶营养丰富且全株可入药．是蒙古族习用药材。扦插和分株法繁殖率很低、时间长，不易获得大量的植株．且会出现品种退化现象。远不能满足生产发展对良种繁殖的需要。目前．尚未发现相关冬葵组织培养方面的报道。所以．本实验的目的是以冬葵叶片和茎段为外植体诱导愈伤组织．为冬葵的快繁和细胞培养奠定基础。1材料和方法1．1材料冬葵种子，由内蒙古民族大学蒙医药学院保存。1．2方法1．2．1外植体最适宜消毒条件的筛选选取嫩叶和茎段．流水冲

6、洗30min．用75％酒精消毒处理30s．叶片用0．1％升汞消毒处理(时间设定20s、30s、40s、50s、60s)，茎段用0．1％升汞消毒处理(时间设定1．5min、2．0min、2．5min、3．0min、3．5min)，无菌水涮洗6遍。切割成5mmx5mm大小．茎段切成lcm长，接种到MS+蔗糖(309／L)+琼脂(7g／L)+6一BA(2mg／L)+NAA(0．5mg／L)培养基中．在25℃、80％湿度、1500k条件下培养。7d后统计叶片和茎段的污染率．1．2．2诱导愈伤组织阶段最适宜培养基的筛选将消毒处理的叶片和茎段分别接种到MS+蔗Al

7、li(309／L)+琼脂(79／L)+抗坏血酸(600rag／L)+6一BA(2mg／L、3mg／L、4mg／L)+NAA(0．2mg／L、0．4ms／L、0．6mg／L)和对照共10个处理的培养基中。21d后统计愈伤组织诱导率．筛选出叶片和茎段诱导愈伤组织的最适宜培养基。培养基中加入抗坏血酸(600mg／L)，是为了预防外植体褐化。2结果与分析2．1外植体最适宜消毒时间的筛选结果不同消毒时间处理的冬葵叶片生长状况见表1。由表1可知：叶片在升汞消毒时间为60s时污染率最低．但此时叶的存活率太低，相比较而言，在消毒时间为50s时有少量污染，但此时存活率最

8、高．所以选择升汞消毒时间为50s。表1不同消毒时间处理的叶片生长状况不同消毒时间处理的茎段生长