铁皮石斛愈伤组织诱导研究进展

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1、铁皮石斛愈伤组织培养研究进展方春夏（浙江理工大学生命科学学院，浙江杭州310018）摘要：近年来，市场对铁皮石斛的需求日趋增加，铁皮石斛的组织培养技术也日趋成熟，本文结合了近年来对铁皮石斛的组织培养研究，从不同外植体，培养基及其培养条件、激素及添加物等方面综述了铁皮石斛愈伤组织诱导的研究概况，并展望了其发展前景。关键字：铁皮石斛愈伤组织培养综述AdvanceonthecalluscultivationofDendrobiumcandidumWall.exLindlFangChunxia（ZhejiangSci-TechUniversity,Zh

2、ejiangHangzhou310018）Abstruct:Recentyears,themarketdemandofDendrobiumcandidumWall.exLindliskeepingimproving,andthetechnologyofculitivateithasbecomemoreandmoremature.Inthispaper,Isummarizethedifferentexplants,hormone,medium,andthecultureconditionstothecalluscultivateofDendrob

3、iumcandidum,furthermore,prospectsthedevelopmentofit.Keywords:DendrobiumcandidumWall.exLindl;callus;cultivate5铁皮石斛（DendrobiumcandidumWall.exLindl5）为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源

4、日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。1.外植体铁皮石斛无性快繁采用的外植体材料主要有种胚、种子、茎段、叶片、根等，在不同的培养基上都能成功地组培快繁出铁皮石斛人工苗[2]。詹忠根[7-8]等以离体根尖细胞成功得诱导出了愈伤组织，并获得再生苗，但他们用叶肉原生质体作为外植体时，虽然得到了愈伤组织，却未获得再生苗。戴小英[5]等对铁皮石斛不同外植体组培快繁技术进行了比较研究，确定了其快繁体系以茎段外植体为宜。2.基本培养基及培养条件铁皮石斛组织培养一般采用的

5、蔗糖浓度为3%，pH值5.6的固体培养基，培养基包括MS，1/2MS，改良MS，B5，N6，SH，KS，VW，1/2N6等，主要在于外植体来源不同所致。适宜光照周期为12h/d；温度以25℃左右为宜[9-18]；周雅琴[11]等概述出N6培养基对铁皮石斛胚的萌发和生长最好，而以茎尖作为培养材料，N6培养基诱导愈伤组织能力明显不如MS。杨立昌[21]等研究发现铁皮石斛愈伤组织在1/2MS培养基上的出芽率比MS培养基好。潘超美[18]等以N6为基本培养基，加入植物激素，并以真菌提取物作诱导子，对类原球茎和愈伤组织进行诱导培养，结果表明铁皮石斛细胞胚

6、的形成可由愈伤组织的表皮细胞内部细胞产生。魏小勇[20]对铁皮石斛原球茎悬浮培养进行了研究，选用了改良的MS液体培养基，首次报道了铁皮石斛原球茎悬浮系的建立。3.激素及添加物铁皮石斛的愈伤组织培养基激素主要为6-BA与NAA，添加物主要为一些天然有机物，如椰汁、苹果汁、土豆汁、马铃薯提取液等，这些都能提供一些必要的微量营养成分、生理活性物质和生长激素等，对铁皮石斛原球茎的增殖和分化有促进作用。王福喜[17]通过实验发现附加6-BA4.0mg/L+NAA0.5mg/L+IBA0.3mg/L的MS能使原球茎最快发育。杨立昌[21]等研究发现6-BA

7、3.0mg/L和NAA0.1mg/L的组合对铁皮石斛愈伤组织增殖影响最大。詹忠根[7]等研究发现离体根尖在B5+2，4-D1.0g/L+6-BA3.0mg/L中培养诱导出的愈伤组织褐化率高，不易转变为原球茎，将其转接到B5+NAA50.5mg/L+6-BA1.0mg/L培养基中培养后愈伤组织分化发育良好。蒋向辉[4]等通过比较研究发现蔗糖浓度过高时，愈伤组织会由致密型转为疏松型，并出现衰老死亡现象。这也许是由于渗透压过高，细胞吸水困难，导致植物生长异常。1.总结与讨论对于铁皮石斛的愈伤组织诱导与培养，目前比较多的是采用茎段为外植体，以蔗糖浓度3

8、%，pH值为5.6的改良的MS培养基做固体培养，但是苏钛[22]等在对于铁皮石斛原球茎高效诱导与增殖研究中发现，在固体培养条件下，虽然可以形成原球茎，