虎杖疏松愈伤组织诱导条件的研究

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1、虎杖疏松愈伤组织诱导条件的研究作者：曾超珍刘志祥黎继烈吴耀辉【摘要】　　目的研究虎杖疏松愈伤组织诱导的最佳激素条件。方法通过单因素和正交实验研究不同外植体、不同浓度的激素组合对虎杖愈伤组织诱导率、疏松程度以及增殖率的影响。结果以诱导率为指标，ＮＡＡ对虎杖细胞脱分化影响最显著。以增殖率为指标，２，４－Ｄ对虎杖的细胞生长分裂影响最显著。结论以叶柄为外植体更容易诱导出疏松的愈伤组织，虎杖愈伤组织诱导和继代增殖最佳的激素组合分别为６－ＢＡ１．５ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／

2、Ｌ和６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．４ｍｇ／Ｌ。【关键词】虎杖疏松愈伤组织诱导增殖　　Abstract：ObjectiveTosｔｕｄｙtheｏｐｔｉｍｕｍｈｏｒｍｏｎｅｆａｃｔｏｒｓｏｆｌｏｏｓｅｃａｌｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆPolygonumcuspidatum．MethodsＢｙｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒａｎｄｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ，ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｐｌａｎｔｓａｎｄｈｏｒｍｏｎｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ

3、ｏｎｃａｌｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｌｏｏｓｅｎａｎｄｇｒｏｗｔｈｏｆPolygonumcuspidatumcuspidatum．ConclusionLeafstalkisｍｕｃｈｅａｓｉｅｒｔｏｌｏｏｓｅｃａｌｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｈｏｒｍｏｎｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓｏｆｃａｌｌｕｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｇｒｏｗｔｈｏｆＰｏｌｙｇｏｎｕｍｃｕｓｐｉｄａｔｕｍａｒｅｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ６－ＢＡ１．５ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌａｎ

4、ｄ６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．４ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．４ｍｇ／Ｌ．　　Keycuspidatum；Ｌｏｏｓｅｃａｌｌｕｓ；Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ；Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　　虎杖Polygonumcuspidatum是蓼科蓼属多年生灌木状的草本植物［１］，具有散风利湿、止咳去痰、清热解毒、活血化淤的功效，其成分主要为蒽醌类、黄酮类、芪类化合物和酚性成分等，具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、降血脂、抗菌和治疗心血管疾病的作用［２～５］。　　近年来，虎杖中的芪类化合物——白藜芦醇是研究热点，随

5、着白藜芦醇的需求量越来越大，由于过度的开发，使得虎杖野生资源面临枯竭。因此利用虎杖组织和细胞培养大规模生产白藜芦醇，是一个重要的解决途径。目前，对虎杖的组织培养已有一些研究［６，７］，但对虎杖的疏松愈伤组织的诱导和增殖还未见报道。本研究优化虎杖愈伤组织的诱导条件，以诱导出生长旺盛、质地疏松的愈伤组织，为虎杖细胞悬浮培养提供试验基础。　　１材料与方法　　１．１材料虎杖幼嫩植株采于湖南中医药大学种植基地。　　１．２方法　　１．２．１外植体消毒选取幼嫩虎杖的叶柄作为外植体，用流水冲洗干净６～１０ｍｉｎ，７５％酒精浸

6、泡３０ｓ，无菌水洗涤３次，再用０．１％升汞溶液消毒１０ｍｉｎ，无菌水冲洗３次，把叶柄切成０．５ｃｍ大小，接种于含不同植物生长调节物质的ＭＳ固体培养基上进行培养。培养条件：温度（２５±２）℃，光照强度１２００ｌｘ，光照１２ｈ／ｄ，每２５天继代１次。　　１．２．２不同外植体诱导实验分别选用虎杖叶柄、叶片和茎作为外植体，接入ＭＳ＋ＮＡＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．１ｍｇ／Ｌ的培养基中培养２５ｄ后，计算其诱导率。　　１．２．３愈伤组织的诱导本实验以ＭＳ为基本培养基，分别添加不同浓度配比的６－ＢＡ及２，４－Ｄ，ＫＴ，ＮＡＡ

7、，采用正交实验考察植物激素对虎杖愈伤组织诱导的影响，得到最佳的激素配比。Ｌ９（３４）实验见表１。　　表1因素水平表（略）　　１．２．４愈伤组织的继代培养选用颜色、质地均一、疏松而无定形的愈伤组织进行继代增殖，正交实验方案设计见表１，每个处理接种１０瓶，接种量为０．３ｇ／瓶，培养２５ｄ后，计算其增殖率。　　１．２．５结果统计愈伤组织诱导率＝诱导出愈伤组织的外植体块数／接种外植体块数×１００％　　愈伤组织增殖率＝Ｗ２－Ｗ１／Ｗ１×１００％　　Ｗ１接种时愈伤组织鲜重，Ｗ２收获时愈伤组织鲜重　　２结果与分析　　２．１

8、不同外植体对虎杖愈伤组织诱导的影响结果见表2。　　表2外植体对愈伤组织诱导的影响（略）　　由表２可知，外植体对虎杖愈伤组织的诱导和生长情况有较大的影响，叶柄最容易诱导出疏松、有活力的愈伤组织。叶片出愈时间最短，５ｄ就有愈伤组织在其切口处出现，生长旺盛，但较为致密，诱导率不如叶柄。茎的愈伤组织质地较疏松，但出愈率较低，污染率高。因此以叶柄为外植体进行愈伤组织的培养适合进一步的细胞悬浮培养。　　２．２激