茯苓病毒与菌丝褐变现象的研究

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1、华中农业大学硕士学位论文茯苓病毒与菌丝褐变现象的研究姓名：李志国申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：林芳灿20070601缩略语表华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文否如需保密，解密时间年月日是否保密独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一同工作的同志对本研究所做的任何

2、贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意．研究蝴：李专t虱帆卅年∥月忉学位论文使用授权书本人完全了解。华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定”，即学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本：学校有权保存提交论文的印刷版和电子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印，缩印或扫描等复制手段保存．汇编学位论文．本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表．传播学位论文的全部或部分内客．注：保密学位论文在解密后适)11于本授权书．学位敝储始钴阂导师始群锄签名日期：

3、}砷年占月加签名日期：歹衫年多月，争日

4、注：请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之间中文摘要茯苓WolfiporiaCOCOSr＆厅叫Ryv．&Gilbn．是一种高等担子菌，其地下生长的菌核(sderotium)是一种传统中药，具有较好的营养价值和药用价值。茯苓人工栽培过程中，菌丝褐变现象时有发生，大规模爆发时甚至会导致整个产区茯苓减产甚至绝产，造成巨大的经济损失。通过对湖北省茯苓主产区英山、罗田等地茯苓菌种生产户进行调查研究发现，目前茯苓菌种生产还处于不规范的状态。以从产区采集分离的9个菌株、从有关单位收集的876菌株以及易于发生褐变的SD菌株为材料，

5、采用常规的稀释分离法，从褐变的菌株中分离到了青霉、木霉、曲霉、酵母及细菌等一些食用菌生产中常见的杂菌，这些杂菌均能不同程度地抑制茯苓菌丝的生长，在交接处茯苓菌丝出现褐变现象，说明杂菌污染是茯苓菌丝褐变的诱因之一。多酚氧化酶(PPO)是酶促褐变的关键酶，运用分光光度计和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测PPO活性发现，不同的菌株在褐变发生后，PPO活性都有显著升高，但易于褐变的SD菌株在褐变前后相对于其他菌株PPO活性却是最低的，说明茯苓菌丝褐变中PPO起到了关键作用，但PPO活性的高低不能作为判断不同茯苓菌株褐变难易程度的指标。

6、对茯苓PPO进行了比较系统的研究，结果表明茯苓PPO活性与温度、pH等密切相关，其最适反应温度为28"C，最适pH为5．0，此外，cu2+、M92+、Mn2+、Ca2+等金属离子对PPO有激活作用，而AgN03、维生素C、NaS03等则抑制其活性。应用dsRNA技术，从褐变及健康对照菌株中均检测到了dsRNA条带，但电子显微镜检测没有发现病毒样颗粒的存在，推测茯苓感染病毒的现象很普遍，病毒可能并不形成病毒颗粒。关键词：茯苓，褐变，PPO，病毒，dsRNAABSTRACTWolfiporiaCOC05(Schw．)Ry

7、v．&Gilbn．，anadvancedbasidiomycete，isgenerallysaprophyticorparasiticalinthepinaceae#antJapaneseredpineandtheMassonpineroot．ItsundergroundgrowthselerotiumisatraditionalChinesemedicinewithhi曲nutritionaIvalueandmedicinalval憾．YingshanandLuotianCountyarethemajorregio

8、nsofWolfiporiaCOCOSplantinginHubeiprovince．MyceliabrowningWaSafrequentphenomenonduringWolfiporiaCOCOSplantingandcausedthereductionofoutput．ElevenstrainscollectedfromdifferentoriginsweretakenaSmaterials，Penicilliumspp．，Trichodermaspp。Aspergillusspp．。Saccharomyce

9、sspp。bacteriumw啪foundinbrowningWolfiporiaCOC05spawnbyroutinedilution-platemethod．Contaminationofotherfungiandbacteriamaybeisoneoftheinducementsinmyceliabrowning．Polyphenolox