成年兔骨髓基质细胞之软骨细胞表型的诱导及体外长期培养时表型的维持

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1、万方数据中国中医急症2009年lO月第18卷第lO期JETCM．Oct．2009，V01．18，No．10成年兔骨髓基质细胞之软骨细胞表型的诱导及体外长期培养时表型的维持李旭升1胡蕴玉2中图分类号：R285．5文献标识码：A文章编号：1004—745X(2009)10—1660—03【摘要】目的探讨体外诱导成年兔骨髓基质细胞(MSCs)表达并长期保持软骨细胞表型的方法。方法原代骨髓基质细胞传代后，以含rhTGF一8，、地塞米松、维生素c等的成软骨培养液诱导培养，以倒置相差显微镜观察细胞形态变化，通过甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化检测诱导的MSCs

2、的软骨细胞表型。诱导的MSCs在体外长期持续或间断以含lng／mlrhTGF—B．诱导液培养，以单纯DMEM培养为对照，观察细胞传5代后的表型变化。结果原代培养的MSCs传代后，在成软骨诱导培养后，细胞逐渐由梭形变为多边形，诱导7d后即可表达Ⅱ型胶原，甲苯胺蓝染色阳性。具软骨细胞表型诱导后的MSCs在间断或持续以低浓度rhTGF—B·诱导下长期培养，仍可保持其软骨细胞表型，对照组则表现为成纤维样细胞。结论成年兔骨髓基质细胞可在体外培养条件现下诱导成软骨细胞，低浓度的TGF—B。可维持诱导的骨髓基质细胞合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原。【关键词】骨髓基质细胞

3、组织工程转化生长因子软骨细胞表型兔StudyonExpressingandMaintainingofChondrocytePhenotypeDifferentiatedfromAdultRabbitBoneMarrowStromalCells厶Xu—s7诂，∥，HuYun—yu21GeneralHospitalofLanzhouMilitaryRegion(Lanzhou730050)2XijingHospital，theFou厅hMilitaryMedwalUniversity(Xi’art710032)【Abstract】Objective：

4、Tostudythemethodforinducingtheexpressionofadultrabbits’bonemarrowstromalcells(MSCs)invitroandkeepingthemaintenanceofchondrocytephenotypeforalongtime．Methods：Afterthegenerationofprimarybonemarrowstromalcells，MSCswhichderivedfromadultrabbitbonemarrowwereinducedinehondro-genieme

5、diumwithrhTGF·131，dexamethasoneandVimminC．Thesemorphologyvariationsofcellswereobservedbyphasecontrastmicroscope．Andthen．toluidinebluestainingandimmunohistochemistryofcollageⅡwereappliedtodetecttheexpressionofchondrocytephenotype．TheseMSCswereculturedcontinuallyoralternatelyby

6、themediumwithrhTGF-131．comparedwiththecellsculturingbyDMEM，thechangesofcellphenotypeafterpassage5wereobserved．Results：AfterthegenerationofprimaryMSCsandthecultureofchondrogenicmedium，themorphologyvariationofthesecellswerefromspindletopolygon．Afterinductionfor7days，theseMSCsex

7、pressedthetypeIIcollagen，whichpresentedpositiveresultsoftoluidinestaining．TheinducedceilscouldmaintainthechondrocytephenotypeculturedcontinuallyoralternatelybythemediumwithlowconcentrationrhTGF-131．However，thecontrolgrouppresentedfibroblast．1ikecells．Conclusion：Adultrabbitbon

8、emarrowstromalcellsdonotonlyformchon-drocyteculturedinvitro，butalsom