脊索细胞促进髓核软骨样细胞增殖及表型维持

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1、万方数据中国修复重建外科杂志2008年8月第22卷第8期脊索细胞促进髓核软骨样细胞增殖及表型维持赵献峰博刘浩1丰干均1邓力2李秀群2梁涛1·939·【摘要】目的分离纯化兔髓核中的细胞成分，观察脊索细胞形态及对软骨样细胞增殖及细胞表型的影响。方法6只4周龄新西兰兔胸腰段脊柱，获取髓核，0．2％II型胶原酶消化法及不连续密度梯度法分离纯化脊索细胞及软骨样细胞。实验分为单纯软骨样细胞培养组(A组)及脊索细胞、软骨样细胞(1：1)共培养组(B组)。倒置相差显微镜观察两组细胞生长情况，测定两组原代及传代细胞成活率，MTT法测定两组第2代细胞

2、增殖曲线，并以甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学染色鉴定两组原代及传代细胞蛋白多糖及II型胶原的表达。结果成功分离、纯化脊索细胞和软骨样细胞。细胞培养观察，原代脊索细胞直径10～15pm，胞浆内富含大小不等的囊泡；原代软骨样细胞直径4～6“m，胞浆内无囊泡。各代细胞成活率A组为89．0％～95．3％，B组为91．3％～96．3％，各代细胞成活率两组间比较差异无统计学意义(P>0．05)。A组细胞培养3～4d进入对数生长期，B组细胞培养2d后进入对数生长期；培养4d后，B组细胞增殖能力高于A组，差异有统计学意义(尸<0．05)。A组3代以内

3、细胞表达蛋白多糖及II型胶原，B组细胞表型维持至5代。结论脊索细胞能促进髓核软骨样细胞的增殖及表型维持；脊索细胞可能在防止椎间盘退变中具有重要意义。【关键词】椎间盘髓核脊索细胞软骨样细胞细胞培养中图分类号：R329．28R681．3文献标志码：ANoToCHoRDCELLSENHANCEPRoLIFERATIoNANDPHENOTYPE-KEEPINGOFINTERVERTEBRALDISCcHoNDRolDcELLs／zHAoxfn哆厂cHf，LJumDl，FENGGn巧“九1，DENG￡只工』xf“日“H2'工j=A．NG丁矗

4、02．1D印nrf卅e，lf9厂0r咖Dp罐鲥fcs，2D如缸fDnD厂s纪研ojI口耐n卵“eE，lgf圩ee砌强S铆招脚工n的m幻砂D厂BfD咖Prnj咖w西fc柚l口HD印i缸‘lsf曲“口打u，lfl，ersf钐chP倒“ls{砌“n订，6l004l，P．R．c珊i，王4．cDr陀sp口”d西喀n“胁。一工f【，HnD，E一，栉口i己fi“矗nD6304@J63．c口卅【Abstract】Ob{ecti、，eToisolateandculturethechondroidcellsandnotochordceUs行omNew

5、ZealandrabbitimmaturenucIeuspulposus(NP)inmonolayer，andto、，aluatetlleresponsivenessofrabbitdisc—derivedchondroidceUstonotochordcellswithrespecttocellproliferationandphenotype．MetlIodsTheNPcellswerereleasedfromthemincedimmatureNPof6NewZealandrabbits(4·week—old)by0．2％co

6、nagenaseIIdigestion．ThechondroidceUsandnotochordcellswerepurifiedbydiscontinuousgradientdensitycentrifugation．ThechondroidceUswerecmturedalone(groupA)andco—clllturedwimnotochordceUs(groupB)(1：1)，andceUproliferationandphenot)rpeincludingProteo百ycanandcoUagen11wereevalu

7、ated．Thecensinbothgroupswereobsenredbytheinvertedmicroscope，andthesun，ivalratesoftheprimaryandpassageceUsweredetectedbytoluidinebluestaining．Thegrowtllcun，esoftllesecondPassagecellsinbomgroupsweredeterminedbyMTT．Besides，也eexpressionsofproteoglycanandcoUagenIIoftllepri

8、maryandPassageceⅡswereexaminedbytoluidineblueandimmunoc”ochemistrystaining．ResIIltsThenotochordceUsandchondroidcellswereisol