重组2型腺相关病毒人骨形成蛋白7转染犬髓核细胞及其对髓核细胞表型的影响

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1、万方数据中国脊柱脊髓杂志2010年第20卷第11期ChineseJournalofSpineand勋ina／co一．2010，V01．20，No．1i重组2型腺相关病毒一人骨形成蛋白7转染犬髓核细胞及其对髓核细胞表型的影响王超锋，阮狄克，张超，王德利，辛洪奎，张燕(海军总医院骨科100048北京市海淀区阜成路6号)【摘要】目的：观察重组2型腺相关病毒一人骨形成蛋白7(recombinantadeno—associatedvims一2expressinghumanbonemorphogeneticprotein一7。rAAV2一hBMP7)转染犬髓核细胞情况及其对细胞表型的影响。方法：用1岁龄B

2、eagle犬W5椎I’日】盘髓核进行髓核细胞体外培养．取第2代髓核细胞进行实验，实验组以rAAV2一hBMP7(1x105v．g，细胞)转染髓核细胞．对照组以重组2型腺相关病毒一增强型绿色荧光蛋白(recombinantadeno—associatedvires一2expressingenhancedgreenfluorescentprotein。rAAV2一EGFP)转染髓核细胞。在转染后4d、7d和14d以PCR检测髓核细胞中hBMP7的mRNA表达．在转染后7d和14d以Westernblot法检测髓核细胞中hBMP7蛋白表达。在转染后4d、7d和14d采用RT-PCR法检测蛋白多糖、I

3、型胶原和Ⅱ型胶原的mRNA含量，采用二甲基蓝及ELISA法分别检测蛋白多糖、I型胶原和Ⅱ型胶原的蛋白含量，结果：实验组髓核细胞表达hBMP7mRNA及蛋白，并于转染后7d时表达量最高，而对照组无表达。实验组髓核细胞蛋白多糖mRNA及蛋白含量在转染后7d和14dB{较4d时明显增高．14d时较7d时亦明显升高(PO．05)；4d时实验组与对照组比较无明显差异，7d和14d时较对照组明显增加(P<0．05)。同组各时间点I型胶原mRNA及蛋白含量均无统计学差异．两组各时间点间比较无统计学差异(P>0．05)。实验组髓核细胞Ⅱ型胶原mRNA及蛋白含量在转

4、染后7d和14d时较4d时明显增高。14d时较7d亦明显升高(P<0．05)．对照组各时间点无统计学差异(P>0．05)；实验组4d时与对照组比较无明显差异，7d和14d时较对照组明显增加(P

5、virus-2mediatedhumanBMP-7genetransfectionOHthephenotypeofnucleuspulposuscells／WANGChaofeng。RUANDike，ZHANGChao，etai／／ChineseJournalofSpineandSpinalCord。2010，20(11)：907—912【Abstract】Objective：Toinvestigatetheeffectsofrecombinantadeno-associatedvirus-2expressinghumanbonemorphogeneticprotein一7(rAAV2一hBM

6、P7)onthephenotypeofcaninenucleuspulposus(NP)cells．Method：TheNPceHswerederivedfromlumbar4-5intervertebraldiscoflyearoldbeagledog．The2ndpassageNPcellswereculturedandtransfectedbyrAAV2-hBMP'／atmultiplicitiesofinfectionofl×10，genomespercell(experimentgroup)，whilethecontrolgroupcellsbyrecombinantadeno—as

7、sociatedvirus一2expressingenhancedgreenfluorescentprotein(rAAV2一EGFP)．NPcellswereassessedsemi-qualitativelyforBMP7expressionbyRT—PCRat4．7and14daysaftertransfection．BMP7proteinexpressedbyNPcellswereassa