腺相关病毒载体介导的timp1对人退变腰椎间盘髓核细胞蛋白多糖的影响

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1、万方数据680中国脊柱脊髓杂志2008年第18卷第9期ChineseJournalofSpineandSpins／Cord．2008，V01．18，No．9腺相关病毒载体介导的TIMPl对人退变腰椎间盘髓核细胞蛋白多糖的影响魏见伟，王德春，胡有谷(青岛大学医学院附属医院脊柱外科266003青岛市)【摘要】目的：探讨腺相关病毒(Adeno—associatedvirus。AAV)载体介导的基质金属蛋白酶组织抑制剂l(tissueinhibitorofmetalloproteinasesl，11MPI)对人退变腰椎问盘髓核细胞

2、的生物学效应。方法：单层培养并鉴定人退变腰椎间盘髓核细胞。采用绿色荧光蛋白标记的腺相关病毒(rAAV2一EGFP)检测其对髓核细胞的转染效率。应用构建的rAAV2一TIMP!转染髓核细胞，通过细胞形态学观察、筠标记氨基酸整合法检测rAAV2-TIMPl对人退变腰椎问盘髓核细胞基质合成的影响。在s5s检测中，以未转染的退变髓核细胞做为正常对照组。结果：光镜下观察所培养的细胞类型以成纤维样细胞为主．Ⅱ型胶原免疫组化和番红O染色鉴定培养细胞为髓核细胞。AAV转染人退变腰椎间盘髓核细胞的转染效率为12％。驾标记整合法检测rAAV2

3、一TIMPl转染组每分钟计数值为341．43±42．85，正常对照组为224．20±29．26．两组间比较差异有统计学意义(P

4、iscs：thebio-logicaleffectsoftissueinhibitorofmetalloproteinases1mediatedbyadeno‘‘associatedvirusvec-tor／WElJianwei，WANGDechun，HUYougu／／ChineseJournalofSpineandSpinalCord。2008．18(9)：680_碣3【Abstract】Objective：Toinvestigatethebiologicaleffectsoftissueinhibitorofmetal

5、loproteinase1(TIMPI)mediatedbyadeno—associatedvirus(AAV)onhumandegeneratednucleuspulposusceHs．Method：Humannu-cleuspulposuscellsacquiredfromdegeneratedlumbarintervertebraldiscswereculturedbymonolayercultureandidentified．ThefluorescencelabledAAV(rAAV2一EGFP)wereusedt

6、odetectthetransducfionrateofan．cleuspulposuscells．rAAV2-TIMPlwastransducedintohumannucleuspulposuscells，andthenthechangesofextracenularmatrixofnucleuspulposusceHswe陀detectedbycellmorphologyand埯incorporationassay．In35Sincorporationassay。thecontrolgroupWasuntransduc

7、eddegeneratednucleuspulposusceUs．Result：ThemajoritytypeofceUswerefibroblast-likecells．Bothimmunohistochemistryofcollagentype1IandSafranineOstainingprovedthatthemonolayerculturedceHswerenucleuspulposusceHs．ThetransductionrateofAAVtothedegeneratednucleuspulposusceUs

8、Was12％．In玛incorporationassay．thecountsperminuteofrAAV2-TIMPlandcontrolgroupWas341．43±42．85and224．20±29．26respectively，whichrevealedstatisticaldifference