腺相关病毒载体介导bmp2基因体内转染兔退变椎间盘的研究

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1、福建医科大学硕士学位论文腺相关病毒载体介导BMP-2基因体内转染兔退变椎间盘的研究姓名：林曦申请学位级别：硕士专业：外科学（骨外科）指导教师：叶君健20090301腺相关病毒载体介导BMP一2基因体内转染兔退变椎间盘的研究中文摘要目的：建立针刺兔腰椎间盘退变的动物模型，并观察腺相关病毒(AAV)介导的骨形成蛋白一2(BMP．2)基因体内转染兔退变的椎间盘后的I、II型胶原和蛋白多糖含量的变化。方法：1．椎间盘退变动物模型的建立，普通级成年新西兰大白兔48只，雌雄不限(重量约3．0蚝，l岁龄)，经右侧腹膜外入路，显露L2-3，L3—4，L4—5，L5-6椎间盘用16号穿刺针于椎间盘纤维环右前

2、外侧刺入，深度为5mm，制造椎间盘退变动物模型。术后分笼饲养。2．体内转染AAV-BMP．2，造模4周后对造模成功的兔子随机分为A，B，C组，每组16只。行左侧腹膜外入路，再次显露L2．3，L3．4，L4—5，L5．6椎间盘，其中A组椎间盘内注射AAV-BMP．2作为实验组。B组椎间盘内注射AAV作为实验对照组，C组椎间盘内注射生理盐水作为空白对照组。3．影像学评估及蛋白多糖检测，注射后的2，4，8周各组随机抽取4只兔子进行腰椎MⅪ平扫后并处死动物取其L2．3，L3．4，L4．5，L5．6椎间盘髓核组织用间苯三酚分光光度法检测髓核组织中的蛋白多糖含量。4．组织学及I，II型胶原检测，注射后

3、第8周处死剩余动物取其相应的椎间盘常规石蜡包埋，组织切片，通过HE染色观察其髓核组织学变化并用免疫组织化学法检测其中的I，II型胶原表达并进行半定量分析。结果：1．在MRI影像学Thompson分级评估中，实验组在各时间点椎间盘MR／信号对比无明显的统计学意义(P>O．05)。实验对照组和空白对照组在各时间点M融信号的变化有明显的统计学意义(P均<0．05)。三组两两比较，实验组和实验对照组，实验组和空白对照组相比较有明显的统计学意义(P均0．05)。’福建省自然科学基金资助项目(C0710010)22．在蛋白多糖含量测定中，

4、实验组蛋白多糖含量在各时间点均高于实验对照组和空白对照组(P均<0．05)。实验对照组和空白对照组蛋白多糖均随时间的变化逐渐减少，各个时间点两组无明显的区别(P均>O．05)。3．普通HE染色结果显示A组椎间盘内髓核细胞数目较多，呈单个或者簇状分布，髓核结构清晰，无纤维样组织填充。而B组和C组的组织结构相似，髓核内细胞数目少，髓核皱缩干瘪，细胞问为纤维样组织填充且排列紊乱。4．免疫组织化学染色显示：A组椎间盘髓核内II型胶原的表达均高于B，c组(P0．05)；I型胶原的表达结果正好相反，A组椎间盘髓核内I型胶原的表达均低于B，C组(P

5、O．05)。结论：体内转染AAV-BMP．2能抑制椎间盘髓核细胞表达I型胶原，促进椎间盘髓核细胞表达合成II型胶原和蛋白多糖，增加椎间盘髓核内的含水量，维持椎间盘内胶原的含量和种类，从而维持了椎间盘内组织学结构和形态。稳定了髓核细胞生长环境，延缓椎间盘的退变。AAV-BMP．2对兔退变的椎间盘有治疗作用。关键词骨形成蛋白．2腺相关病毒兔椎间盘MⅪ蛋白多糖I型胶原II型胶原3EffectofBMP--2genemediatedbyadeno—·associatedvirusontherabbitanularneedlepuncturem

6、odelofintervertebraldiscdegeneration．AbstractObjective：Toevaluatethepotentialofbonemorphogeneticprotein2(BMP-2)genetherapyapplicationonrabbitinterverbraldiscdegeneration，usingtherecombinantAdeno—associatedvirusvectorexpressingBMP一2．Methods：1．L2-3，L3-4，L4—5，L5—6lumbardiscsof48skeletallymatureNewZea

7、landwhiterabbitswerepuncturedtosetupinterverbraldiscdegenerationmodel．2．Subsequently,48rabbitswererandomlydividedintothreegroups．GroupA(n=16)wereinjected晰ththeAdeno—associatedvirusexpressingBMP一2，GroupB(n=16)were