腺相关病毒介导的htgfβ1和hvegf双基因联合体内转染阻逆羊椎间盘退变的生物学效应

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1、青岛大学硕士学位论文腺相关病毒介导的hTGFβ1和hVEGF双基因联合体内转染阻逆羊椎间盘退变的生物学效应姓名：胡鹏申请学位级别：硕士专业：外科学（骨外科）指导教师：胡有谷20070527中文摘要腺相关病毒介导的hTGFB，和hVEGF双基因联合体内转染阻逆羊椎问盘退变的生物学效应摘要目的：建立羊椎间盘退变模型；应用腺相关病毒(adeno．associatedvires，枷介导人转化生长因子13l(humantransforminggrowthfactor-B1，hTGF-B1)和人血管内皮生长因子(hum

2、anvascularendothelialgrowthfactor，hVEGF)基因体内转染羊退变椎间盘，观察AAV-hTGF-13l和hVEGF的表达以及单基因转染和双基因联合转染对退变椎间盘的生物学作用。方法：成年SPF(specificpathogenfree，SPF)级去势山羊，通过11号刀片损伤椎间盘Ii{『外侧纤维环的方法建立椎间盘退变模型，造模后4、8、12、24周分别进行影像学和组织学检测，观察造模椎间盘变化。将造模成功动物随机分为A、B、C、D和E5组，各组分别于造模椎间盘内注射50“L试

3、剂：A组rAAV2．hTGFl3l、B组rAAV2．hVEGF、C组rAAV2．hTGF13l+rAAV2．hVEGF、D组磷酸盐缓冲液(PBS)、E组rAAV2-EGFP(enhancedgreenfluorescentprotein，EGFP)。转染后2、4、8、12周时分别进行影像学、组织学和生物化学检测。结果：(1)影像学和组织学检测结果表明造模动物椎问盘发生缓慢、可靠的退行性变。(2)基因转染后椎问盘的变化①影像学检测：A组、c组动物椎间盘高度指数(discheightindex。DHI)均高于D

4、组，C组更显著，差别有统计学意义；B组与D组无显著性差异。②组织学检测：既、Safranine0染色后观察到A组、c组动物椎问盘细胞数目减少量、结构紊乱程度、髓核纤维环界限模糊程度等均低于D组。B组与D组无显著性差异。免疫组化染色后观察到：A组、C组动物椎问盘髓核中Il胶原含量下降程度、纤维环中I胶原含量下降程度均低于D组，C组更显著，差别有统计学意义，B组与D组无显著性差异；转染两周后，A组、B组和C组的rAAV2．hTGFBl、rAAV2．hVEGF和rAAV2一hTGFBl+rAAV2．hVEGF较D

5、组显著增多：E组动物转染后12周仍可观察到EGFP的表达。③生物化学检测：A组、C组动物椎间盘I、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的含量下降程度均低于D组，c组更显著，差别有统计学意义；B组与D组无显著性差异。注：本课题受国家自然科学基金项目支持(项目批准号；30271318；分类号：c03030306)中文摘要结论：(1)本方法可以成功建立一种椎间盘退变动物模型；(2)rAAV2一hTGFl31和rAAV2．hVEGF转染退变的椎问盘后，可持续表达12周；(3)hTGFB1转染可在一定程度上逆转椎间盘退变：(4)hVE

6、GF可协同hTGFBl逆转椎间盘退变；(5)hTGF6l和hVEGF共转染具有协同效应。硕士研究生；胡鹏(骨外科)指导教师：胡有谷教授关键词：椎问盘；动物模型；腺相关病毒；转化生长因子Bl：血管内皮生长因子；转染；基因治疗注：本课题受屋家自然科学基金项目支持(项目批准号：30271318；分类号；(：03030306)英文摘要THEBIOLOGI(：ALEFFECrSOFADENOASSOCIATEDVlRUS-MEDIATEDhTGF-BIANDhVEGFENCODINGGENESTItANSFERONT

7、HEGOATDEGENER棚VEINTERVERTEBRALDISCSAbstract0bjectives：Weestablishamodelofintervertebraldiscdegenerationingoat．andthentransfectnotonlyhTGF-B1mediatingbyadeno—associatedvirusbutalsohVEGFencodinggenestotheintervertebraldiscdegenerationingoat．Atlastweobserveth

8、eexpressionofAAV—hTGF-13landhVEGFaswellasthebiologicaleffectsofmonogenictransfectionanddigenictransfectiononthedegenerativeintervertebraldisc．Methods：WeestablishamodelofintervertebraldiscdegenerationinSPFweth