raav2ctgf和timp1双基因联合转染恒河猴退变腰椎间盘的生物学效应

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1、万方数据生堡置越塞盍垫!Q生3旦簋3Q鲞筮2期￡蜮望j盟h鲤，丛墼h垫!Q。!丛：婴，塑Q：．≥rAAV2一CTGF和TIMP1双基因联合转染恒河猴退变腰椎间盘的生物学效应孔杰胡有谷刘勇齐宗华-287·-基础研究·【摘要】目的研究腺相关病毒(adeno-assoeiatedvirus2，AAV2)介导的结缔组织生长因子(con—nectivetissuegrowthfactor，CTGF)和基质金属蛋白酶组织抑制因子l(tissueinhibitorofmetalloproteinas—esl，TI

2、MPl)双基因体内转染退变的恒河猴腰椎问盘的生物学效应。方法恒河猴9只，雌性4只，雄性5只；年龄4"--7岁，体重4．5^7kg。CT引导下经皮穿刺纤维环诱导恒河猴腰椎间盘退变，微创经皮注入携带CTGF和TIMPl双基因腺相关病毒颗粒。应用RT-PCR测定细胞因子的表达，RT-PCR、35S整合法观察双基因联合转染对退变椎间盘的生物学作用。结果双基因转染后8、16、24周时CTGFmRNA表达量分别为PBS对照组的10．02、2．39、O．91倍；TIMPlmRNA表达量分别为PBS对照组的6．08

3、、3．81、2．67倍；II型胶mRNA表达量分别为PBS对照组的145．51％、174．72％、113．73％；蛋白多糖mRNA表达量分别为PBS对照组的461．19％、191．46％、301．39％；蛋白多糖合成效率为分别PBS对照组的455．06％、285．97％、165．58％。结论CTGF和TIMPI双基因联合转染后可以在体内较长期表达，并能促进体内蛋白多糖和Ⅱ型胶原的合成，延缓椎间盘的退变。【关键词】腺病毒，猴；基质金属蛋白酶l；恒河猴；椎间盘BiologicaleffectsofCTG

4、FcombinedwithTmPlmediatedbyadenoassociatedvirustodegeneratedlumbarintervertebraIdiscsinrhesusmonkeyKONG皿，HUYou-gu,LIUYong,eta1．DepartmentofSpinalSurgery,theA历liatedHospitalofMedicalco如酽，Qins矗aoUniversity,Qingdao266003,China【Abstract】ObjectiveTostudythe

5、biologicaleffectofconnectivetissuegrowthfactor(CTGl9andtissueinhibitorofmetallopmteinasesl(TIMPllmediatedbyadencpassociatedvirus2(AAV2)torhesusmonkeylumbarintervertebraldiscsinvivo．MethodsToestabhshanovelmodeIoflumbardiscdegenera—tionintherhesusmonkeyu

6、singpercutaneousneedlepunctureguidedbyCT．TherAAV2．CTGF—IRES-11MPlwaginiectedpercutaneouslywithminimalinvasivetechnique。ThemRNAexpressionofc1’GFand，nMPlwasdeterminedthroughRT-PCR．，11lebiologicaleffectofrAAV2-CTGF．IRE孓r兀MPIWasexaminedbvRT-PCR，驾incorporat

7、ionassay．ResultsAtthe8th，16th，24thweekaftergenetransfection，theex-pressionofCTGFmRNAweretO．02，2．39，O．91timesrespectivelycomparedwiththePBScontrolgroup；r11MPlmRNAexpressionwere6．08．3．81，2．67timesrespectivelycomparedwiththePBScontrolgroup；col-lagentypeII

8、mRNAexpressionfort}IePBScontrolgroupwere145．51％，174．72％，113．73％respectively；proteoglyeanmRNAexpressionwere461．19％。191．46％。301．39％respectivelycomparedwiththePBScon—trolgroup；theefficiencyofproteoglycansynthesiswere455．06％，285．97％，165．58％