人正常和退变腰椎间盘中timp1的表达及其意义

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1、人正常和退变腰椎间盘中TIMP1的表达及其意义【摘要】目的探讨金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP1）mRNA在正常与退变椎间盘中表达的差别及意义。方法利用荧光定量PCR技术检测TIMP1mRNA在正常椎间盘（9个）与退变椎间盘（30个）组织的含量，结合年龄、病程、病理类型进行分析。结果TIMP1在正常椎间盘组织表达量为0.900±0.289，退变椎间盘中TIMP1mRNA表达量为0.340±0.241，两者差异有显著性（t=5.841,P<0.05）。退变椎间盘中，不同年龄、病程及病理类型组间TIMP1mRNA的表达量差异无统计学意

2、义。结论TIMP1mRNA的含量下降在腰椎间盘退变过程中起着重要作用，但未见与年龄、病程及病理类型有明显的关系。【关键词】椎间盘金属蛋白酶1组织抑制剂人　　［ABSTRACT］ObjectiveTostudytheexpressionsandtheirsignificanceoftissueinhibitorofmetalloproteinase1(TIMP1)innormalanddegenerativelumbarintervertebraldiscs.MethodsArealtimefluorescencequantitativ

3、eRTPCRRNAofTIMP1innormalanddegenerativelumbarintervertebraldiscs.Theresultsostlylargelyinthenormaldiscs,andlessinthedegenerativeones.NosignificantdifferencesofexpressionofTIMP1mRNAsoftheage,historyandpathologicaltypesinthedegenerativediscs.ConclusionThedecreaseofTIMP1pla

4、ysanimportantroleintheprocessofthediscdegeneration,etalloproteinase1;Persons腰椎间盘突出症是引起腰腿痛的主要疾病之一。腰椎间盘突出的病理实质为腰椎间盘退变，其病理生物学基础为椎间盘基质合成和降解的失衡。基质金属蛋白酶（MMPs）为降解细胞外基质的重要细胞因子，而基质金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）则为MMPs的特异性拮抗剂。国内外研究结果显示，基质金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP1）在冠状动脉疾病、肺脏疾病、肠道肿瘤、肝细胞瘤中有多种生物学功能[1～4]，但是T

5、IMP1在人正常和退变椎间盘髓核组织中的表达情况仍不清楚。本实验旨在探讨TIMP1mRNA在正常与退变椎间盘中表达的差别及意义。　　1材料和方法　　1.1材料RNA提取试剂TRNzolA+（TIANGEN公司），Takara荧光定量PCR试剂盒（大连宝生物公司），荧光定量PCR仪器（美国ABI公司7500定量PCR仪）。TIMP1和内参GAPDH的上下游引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，荧光探针由大连宝生物公司合成。　　1.2方法　　1.2.1椎间盘的收集与分组　　正常组：9个正常的椎间盘取自3名意外死亡的正常人，均为男性，年龄

6、18～22岁，平均年龄20.33岁。退变组：30个退变椎间盘取自2006年8～10月青岛大学医学院附属医院脊柱外科因椎间盘突出症而手术的病人，男18例，女12例，年龄24～72岁，平均年龄45.90岁。所有椎间盘髓核组织均在无菌条件下取出后迅速放于-80℃冰箱冻存。　　1.2.2总RNA的提取及cDNA的合成　　采用TRNzolA+RNA提取试剂按操作说明提取正常及退变椎间盘的总RNA，紫外线分光光度计测定A260的值以估算总RNA浓度，测定A260/280的值来检测RNA的纯度。用PrimeScriptTMRTReagent试剂盒将mR

7、NA反转录为cDNA。反应体系为：5×buffer2μL，PrimeScriptTMRTEnzymeMixⅠ0.5μL，OligodTPrimer0.5μL，Random6mers0.5μL，TotalRNA1μg，加RNaseFreedH2O至总体积10μL，将上述反应液混匀后置于37℃水浴中作用15min后，置于85℃水浴中5s，使酶灭活。　　1.2.3实时荧光定量PCR引物设计合成　　TIMP1的引物序列，上游引物F:5′GCTTCTGGCATCCTGTTGTTG3′;下游引物R:5′CTTCTGGTGTCCCCACGAACT

8、3′；Taqman探针:5′AGACGGCCTTCTGCAATTCCGACCT3′，扩增片段长度133bp。内参GAPDH的引物序列，上游引物F:5′CTTAGCACCCCTGGCCA