医药学医学毕业论文 原发性肝细胞癌病人pbmcs中hbv x、p基因的整合

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1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号：XXXXXXXXX姓名：XXX专业：医药学医学论文题目：原发性肝细胞癌病人PBMCs中HBVX、P基因的整合指导老师：XXX二〇一一年十二月十日作者：王淑霞闫志勇王力秋赵海燕刘成玉王斌【关键词】癌,肝细胞;肝炎病毒,乙型;基因;病毒整合　　［摘要］目的探讨外周血单个核细胞（PBMCs）中乙型肝炎病毒（HBV）X、P基因整合与原发性肝细胞癌（HCC）的关系。方法分离HBsAg阳性的40例原发性肝癌病人PBMCs，提取基因组DNA;分别设计HBVX基因、P基因PCR引物，检测HCC病人PBMCs基因组中HBV的X基因和P基因的整合情况。结

2、果HCC病人X基因在PBMCs中的整合率为77.5%（31/40），P基因整合率为15.0%（6/40），二者差异有显著性（χ2=31.43，P0.001）。结论PBMCs中存在HBVX、P基因的整合，X基因片段的整合及表达是HCC发生的主要因素。　　［关键词］癌，肝细胞;肝炎病毒，乙型;基因;病毒整合　　　［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetherelationshipbetweenprimarylivercancer（PLC）andintegrationofHBVXgeneandPgeneinperipheralbloodmonon

3、uclearcells（PBMCs）inPLCpatients.MethodsPrimersX1，X2weredesignedforHBVXGeneandP1，P2forPgene.ExtractedDNAfromisolatedPBMCsin40PLCpatientswithHBsAgpositive.PCRwasusedtodeterminetheintegrationofHBVPandXgene.ResultsTheintegrationofXgeneandPgenewas77.5%（31/40）and15.0%（6/40）respectively.Thedi

4、fferencewassignificant（χ2=31.43，P0.001）.ConclusionTheintegrationofHBVXandPex-istsinperipheralbloodmononuclearcells，andtheexpressionofXgeneplaysamajorroleintheoccurrenceofprimarylivercancer.　　［KEYWORDS］carcinoma，hepatocellular;hepatitisvirus，typeB;genes;virusintegration　　　　乙型肝炎病毒（HBV）为嗜

5、肝DNA病毒，主要侵犯肝脏，也可侵犯肝外组织，尤其是外周血单个核细胞（PBMCs）［1，2］。人体感染HBV后可导致病毒携带者、急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、爆发性肝衰竭等不同临床类型，部分慢性乙型肝炎可发展为肝硬化，大约30%～40%的肝硬化病人最终可发展为肝细胞癌（HCC）。尽管HCC发生的分子生物学机制尚不十分明确，但已确定慢性乙型肝炎病毒感染为HCC的主要致病因素，HBV感染者发展为HCC的危险性是未感染者的100倍以上［3］。研究认为，HBV感染可能通过多种途径引起HCC发生，其中HBVDNA整合于肝细胞基因组是HCC发生的主要机制之一;此外，也有研究发现H

6、BV基因可以整合于PBMCs中［4］。本文采用PCR检测PBMCs中HBVX、P基因的整合情况，以探讨它们与HCC的关系，现报告如下。　　1资料与方法　　1.1研究对象临沂市人民医院2003～2004年住院确诊的HBsAg阳性的原发性HCC病人40例，男34例，女6例;年龄38～72岁，平均（56.3±7.3）岁。其中Ⅰ期3例，Ⅱ期15例，Ⅲ期22例。5例HBsAg阴性的原发性HCC病人和5例HBsAg阴性的健康体检者作阴性对照和健康对照。　　1.2主要试剂DNA提取试剂盒、TaqDNA聚合酶均为Pro-mega公司产品;无RNase的DNaseⅠ为Sigma公司产

7、品;引物由上海生工公司合成。　　1.3PBMCs的分离和细胞中基因组DNA提取所有研究对象均于早晨无菌抽取空腹静脉血5mL，置于EDTA抗凝的无菌试管中，4℃保存运输，标本收集后4h内使用低渗溶解红细胞法提取全血中PBMCs。使用Promega公司的DNA提取试剂盒提取1mL全血PBMCs中的细胞基因组DNA。　　1.4引物设计从GenBank获得多株HBV的P基因及X基因全序列，用DNAStar软件分析编码DNA多聚酶-逆转录酶P基因的高保守序列及包含DR2在内的X基因序列，分别设计P、X基因的上、下游引物，序列见表1。　　　　表1P、X基因的上、下游引物序列