hbv x基因对成人肝细胞hl7702线粒体功能的影响

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1、HBVX基因对成人肝细胞HL7702线粒体功能的影响作者：林纳,李丹,陈红英,陈治新,王小众【摘要】目的:研究HBVX基因与线粒体COXⅢ基因相互作用以及对线粒体功能的影响。方法:将HBVX基因真核表达载体pCDNA3X及空载体pCDNA3转染成人肝细胞HL7702细胞,经过2周G418筛选,获得稳定表达的新细胞株,分别命名为HL7702/HBx和H7702/pcDNA3,RTPCR和Westernblot方法证实HBVX基因在HL7702/HBx细胞内的稳定表达。抽提细胞总RNA进行半定量RTPC

2、R及分离细胞线粒体进行Westernblot检测COXⅢ表达水平变化,并通过酶动力学方法检测线粒体细胞色素氧化酶活性。结果:重组质粒pcDNA3X转染后经G418筛选,RTPCR和Westernblot分析结果显示HL7702HBx细胞能够稳定表达HBVX基因。RTPCR和Westernblot结果发现HBVX基因下调COXⅢ蛋白表达而不影响mRNA水平表达。酶动力学检测发现线粒体细胞色素C氧化酶活性降低。结论:HBVX基因通过转录后水平调节COXⅢ表达,HBx通过与COXⅢ相互作用抑制线粒体细胞色素氧化

3、酶活性。【关键词】HBx;COXⅢ;线粒体细胞色素氧化酶［Abstract］AIM:TostudytheeffectofHBxonanewHBx14interactedproteinCOXⅢandmitochondria.METHODS:ArecombinanteukaryoticexpressionplasmidpcDNA3Xwasconstructed,thenpcDNA3XandpcDNA3weresteadilytransfectedinHL7702separately,namedHL7702/H

4、BxandHL7702/pcDNA3.TheexpressionofCOXⅢinHL7702/HBx,HL7702/pcDNA3andHL7702cellsweredetectedbyRTPCRandwesternblot.Mitochondrialcytochromecoxidaseactivitiesofthreegroupswereassayedspectrophotometricallyat550nmbyusingpartiallypurifiedmitochondria.RESULTS:COXⅢ

5、mRNAexpressiondidn’tchange,whileproteinexpressionisdownregulatedinHL7702/HBx.CytochromecoxidaseactivitywasmuchlowerinHL7702/HBxcomparedwithHL7702andHL7702/pcDNA3cells.CONCLUSION:HBxcandownregulateCOXⅢexpressionthroughposttranscriptionallevelandinhibitmi

6、tochondrialcytochromecoxidaseactivity.［Keywords］HBx;COXⅢ;cytochromecoxidase［摘要］目的:研究HBVX基因与线粒体COXⅢ基因相互作用以及对线粒体功能的影响。方法:将HBVX基因真核表达载体pCDNA3X及空载体pCDNA3转染成人肝细胞HL7702细胞,经过2周G418筛选,获得稳定表达的新细胞株,分别命名为HL7702/HBx和H147702/pcDNA3,RTPCR和Westernblot方法证实HBVX基因在HL7702/

7、HBx细胞内的稳定表达。抽提细胞总RNA进行半定量RTPCR及分离细胞线粒体进行Westernblot检测COXⅢ表达水平变化,并通过酶动力学方法检测线粒体细胞色素氧化酶活性。结果:重组质粒pcDNA3X转染后经G418筛选,RTPCR和Westernblot分析结果显示HL7702HBx细胞能够稳定表达HBVX基因。RTPCR和Westernblot结果发现HBVX基因下调COXⅢ蛋白表达而不影响mRNA水平表达。酶动力学检测发现线粒体细胞色素C氧化酶活性降低。结论:HBVX基因通过转录后水平调节CO

8、XⅢ表达,HBx通过与COXⅢ相互作用抑制线粒体细胞色素氧化酶活性。［关键词］HBx;COXⅢ;线粒体细胞色素氧化酶乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus,HBV）慢性感染是导致肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）的主要危险因子,HBVX基因全长转录体编码的X蛋白（HBx）含154个氨基酸,相对分子质量(Mr)约为1650