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1、HBx基因及其产物与原发性肝细胞癌时嗨什侈)【勘司'罨舒吲;t～;讶HBx基因及其产物与原发性肝细胞癌厶磐综述诸亚君校审尺7;雪72原发性肝细胞癌(下简称原发性肝癌)为世界第八大恶性肿瘤,在非洲和东南亚发病率很高,在中国列男性恶性肿瘤的第三位.在过去的几十年中,』,们对其进行了一系列流行病学和实验室研究,确定了原发性肝癌与乙型肝炎病毒(HBv),黄曲霉毒紊,饮酒等很多因素有关.其中,HBV和原发性肝癌之问有明显且特异的关系-但是,HBV导致原发性肝癌的机理至夸仍未完全阐明.研究表明,在HBV慢性感染过程中,H
2、BVDNA常整台于罕主肝细胞DNA之中E4.s3有人认为,HBVDNA有可能整台于原癌基因附近,从而导致一些原癌基因的激活J.但迄今为止,还未发现在罕主DNA上有HBVDNA固定整合的住点j相反,却发现HBVDNA在不同宿主DNA上整台位点是不同的J.另外一种解释是,病毒DNA本身可能古有一种病毒癌基因,但通过对病毒DNA分析和对病毒基因组转化活性的研究,并未发现此种基因.-.随着近几年对HBV的x基因(HBx)研究的不断深^,发现其产物(x蛋白或HBxAg)具有反式激括功能,同时还可与抑癌基因产物P蛋白相互
3、作用呻].越来越多的资料显示,HBx基因及其产物在原发性肝癌发生过程中起着十分重要的作用].对HBx的垒面了解,将有助于对HBV致癌机理的认识.1HBx基因殛其产物的结构特点HBVDA为部分双链环状DNA,病毒DNA每条链都有一不连续的5'末端,由于两条DNA链5粘性末端的重叠使双链DNA能够保持环状构象(见圈1).病毒DNA长链(负链)为3000~3300bp,短链(正链)从1700bp到2800bp不等.在HBVDNA长链上具有四个开放阿读框架(ORF)S—ORF,C—ORF,P—ORF和x—ORF,所编
4、码的病毒多肽分别为;1)组成病毒包被的多肽HBsAgI2)组成病毒外壳蛋白的多肽HBcAg和其被剪切后形成的可溶性蛋白HBeAgI3)具有反转录酶括性和RNaseH括性的多肽,其还可作为病毒DNA负链合成的蛋白质引物}I)具有反式激活作用的x蛋白n.其中编码x蛋白的X—ORF位于病毒基因组的粘性末端附近l376至1837位(见图1),编码一作者单位;10o021中国医学科学院肿瘤研究所生化室l54个氨基酸的蛋白,分子量17kD=由于病毒DNA常于粘性末端与宿主基因相整台,使宿主经常表选部分删除的x蛋白,但研究
5、表明此种蛋白仍然具备反式激活功能":.X蛋白也可与核心抗原以融台蛋白的形式表达,对病毒基因的复制有很重要的作用]掐1盯围1HBV(adw2)基因图谱:内侧双环代表病毒DNA链,在短链(+)DNA上的虚线部分表示短链3'末端可能存在的区域点组成的线表示共竹结合在短链(__)DNA5'端的蛋白质引物太箭头代表迄今所知的功能性开放固读框架(ORF)厦其长链(一)DNA上转录的方向将DNA唯一EcoRI酵切位点链为位置1,每十(YRF的起始和终止密码子的桉苷酸序列定位都是参厢它作出的l1应用分子克隆技术,已将HBx基
6、因克隆到原桉及真棱表达载体,并在大肠杆菌内台成了吉有HBxAg的融台蛋白,应用于抗x蛋白单克隆抗体的制备口.使用这类单克隆抗体,曾对人血清及肝组织中HBxAg的表达状态进行了检测卜.Feiteison等应用酶联免疫方法在半数以上乙肝患者血清中检测到了HBx蛋白.Zhu等n通过对原发性肝癌患者肝组织中HBxAg的检测,发现HBxAg是原发性肝癌中最普遍存在的HBV感染标志,另外还在一些无HBsAg或HBcAg的样本中检出HBxAg.因此认为在HBV感染患者肝中的HBxAg表达状况可作为一个重要的原发性肝癌诊?3
7、16?断标志.2HBx豆HBxAg与原发性肝癌随着对HBx基因及其产物HBxAg研究的不断深人.发现HBx基因的持续表达与原发性肝癌有密切关系.Zentgra{等利用抗X蛋白的单克睡抗体,分别检涮了慢性肝炎病人肝组织和原发性肝癌中HBx基因的表达情况,在3O的慢性肝炎病人和8O的原发性肝癌病人中,可检测蓟能与抗体HBxAb起反应的蛋白(XRP),但不能确定它是HBx基因编码的HBxAg,还是宿主所编码的交叉反应多肽.为进一步验证原发性肝癌细胞中是否存在HBx—Ag,Zhu等_I应用免疫沉淀,Western和S
8、outhern印迹分析等手段,对3O倒原发性肝癌进行了检涮.结果表明,在l9例检出有XRP的样品中,都有HBxDNA模板存在,确认了XRP即是HBV所编码的HBxAg.Diamantis等0"采用RT—PCR方法,检测了48倒原发性肝癌组织中HBV基因在RNA水平的表达情况.其中.HBs基因表达者检出2倒,HBc基因检出7例.而HBx基因检出4O倒.HBx基因在80以上的受捡原发性肝癌中表达.从而,
