FQPCR和ELISA联合检测乙型肝炎的意义分析.doc

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1、FQPCR和ELISA联合检测乙型肝炎的意义分析作者：李国钢，方美芳，万汝根【摘要】目的：探讨血清HBVDNA水平与HBV血清标志物(HBVM)的相关性及其在临床中的应用。方法：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(FQPCR)对1560例临床血清标本进行对比检测。结果：血清HBVDNA水平与血请HBVM的表现模式有很大关系。以HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)模式患者中的HBVDNA阳性检出率最高，为93．7％；DNA平均拷贝数为7．76×107／ml，显著高于其他HBVM模式的患者(P

2、<0.01)。其他HBsAg(+)模式：HBVDNA阳性率分别为78．5％、42．7％，平均拷贝数分别为2．88×105／ml、8．91×104／ml，患者血清中HBVDNA的含量差异无显著性(P>0.05)；另外，HBsAb(+)及HBVM全阴患者中也有HBVDNA检出；HBsAg(+)中也有患者未检到HBVDNA。结论：单凭血清免疫标志物模式难以准确判断HBV的复制程度及传染性的强弱，定量检测HBVDNA能真实反映HBV的复制情况，对诊断、治疗乙型肝炎患者及疗效观察具有较大的指导意义。【关键词】定量PCR；乙

3、型肝炎病毒；血清标志物　　目前，临床上乙型肝炎感染的诊断主要依赖于HBV血清标志物(HBVM)及HBVDNA的检测,HBVDNA先于血清标志物出现，而且灵敏度高，因此可早期诊断乙型肝炎，并可判断患者是否具有传染性；此外，FQPCR法检测血清中HBVDNA水平，在抗病毒疗效观察和病情预测等方面具有重要的临床应用价值。用ELISA法测定HBVM比较简单，但只能提供血清标本中HBV的间接证据，而且敏感牲低。本文采用两种方法联合检测1560例临床标本进行对照。以探讨两者的关系及临床应用，现报告如下。　　1对象与方法　　1．1对象选择

4、2006年1月至6月本院门诊及住院进行HBVDNA检测的患者，取其血清同时进行HBVM的检测。　　1．2试剂与仪器HBV荧光定量PCR诊断试剂盒由中山医科大学达安基因诊断中心提供；ELISA乙型肝炎系列诊断试剂盒由上海科华公司提供。仪器采用德国Roche公司生产的LightCycler。　　1．3方法操作方法见文献［1］，每次检测均设阴性、阳性和临界值对照以及4个标准梯度参控品，共含量分别为1×104、1×105、1×106、1×107拷贝／ml。　　1．4统计学处理定量结果由计算机自动分析得出，采用对数值表示HBV3DNA拷贝数

5、；采用t检验和χ2检验。　　2结果　　　　FQPCR法检测HBVDNA水平与ELISA法检测HBVM模式的关系见表1。由表1可见，不同HBVM模式的患者中均存在不同程度的病毒复制。Ⅰ组和Ⅱ组的HBVDNA阳性率均高于其他各组，Ⅰ组的HBVDNA拷贝数对数值显著高于其他各组(P<0．01)；Ⅱ组HBVDNA拷贝数对数值与Ⅲ组相比，差异无显著性(P>0．05)；Ⅳ组为具有一定免疫力的患者，其HBVDNA拷贝数对数值与Ⅴ组比较差异无显著性(P>0．05)。　　　　表1FQPCR法检测HBVDNA水平与EL

6、ISA法检测HBVM模式的关系　略　　3讨论　　本文结果表明：Ⅰ组和Ⅱ组患者的HBVDNA阳性检出率较高，分别为93．7%和78．5％，与有关报道相符［2，3］；其HBVDNA平均含量分别为7．76×107和2．88×105拷贝／ml，表明患者体内HBV复制程度依次递减［2，4］。Ⅱ组结果表明：仅以HBeAg(+)／HBeAb(+)的转换作为病毒复制终止的标志具有一定的局限性，张复春［5］等的研究表明，HBeAb(+)的出现并不能表示HBV复制的终止，而只是复制水平的下降。关于HBeAb(+)而有病毒复制的原因可能是乙型肝炎病毒前

7、C区基因变异，逃避免疫清除而继续活跃复制［6］。Ⅳ组结果显示：在已感染且有免疫力或者打过疫苗具有免疫力的血清标本中，也可能存在HBVDNA的低水平的复制，与Brechot等的报道一致［7］；说明HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)的出现并不标志着HBV复制的停止，也可能是乙型肝炎变异株的存在，不能完全认为其无传染性，仍需进一步做HBVDNA的检测。Ⅴ组结果显示：HBVM全阴性模式的阳性检出率为4.5％，资料证实［8］HBVDNA的出现先于其他血清标志物，受检者可能处于感染早期。综上所述：单凭血清免疫标志物模式难以

8、准确判断HBV的复制程度及传染性的强弱，定量检测HBVDNA能真实反映HBV的复制情况；因此，两者的联合检测对诊断、治疗乙型肝炎患者及疗效观察具有较大的指导意义。【参考文献】　　［1］程纲，何蕴韶，周新宇